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《保健食品衛生學理化檢驗規范(征求意見稿)》

文章來源:市場監管總局 編輯:華道顧問

 
 

 
第一部分
 
General Principles
 

一、主題內容和適用范圍
Content and Scope of Application
 
1.本規范規定了保健食品和原料的衛生學技術要求的檢驗項目及方法。
2.本規范適用于保健食品的注冊、復核和備案檢驗、監督抽驗、風險監測及常規檢驗項目的確定和方法的選擇。
二、基本要求
Basic Requirements
 
1. 凡保健食品,符合GB 16740《食品安全國家標準 保健食品》的各項要求。附表1所列檢測項目是對該標準的補充規定。
2. 保健食品中食品添加劑的使用應符合GB 2760的規定和(或)有關規定。檢測機構可根據實際需要,按產品配方檢測合成色素、防腐劑、甜味劑及抗氧化劑的含量。
3. 保健食品的包裝材料符合GB 4806.1《食品安全國家標準 食品接觸材料及制品通用安全要求》的要求
4. 進行輻照滅菌的產品,其輻照源、輻照劑量等均應符合相應的國家標準、行業標準或有關要求。
5. 檢驗機構受理保健食品檢測時,申報單位應提供該產品的配方、工藝、產品技術要求及功效成分/標志性成分檢測方法研究驗證等相關資料
6. 申請單位在對產品進行功效成分/標志性成分檢測時,如國家標準中所提供的檢測方法不適用于該產品檢驗時,可優先選擇本規范第二部分提供的檢測方法,并進行必要的方法學適用性研究;如規范中所提供的檢測方法不適用于該產品檢驗,申請單位可選擇行業標準、國際上權威分析方法進行測定,并進行必要的方法適用性研究。注冊檢驗機構對所附材料進行審核,必要時進行有關驗證和方法確認,如申報單位提供的方法不適合送檢的樣品時,注冊檢驗機構不得擅自修改,應將有關情況反饋申報單位,由其進行研究并提供方法后,再對送檢樣品進行試驗,確保試驗方法與送檢產品技術要求中規定的方法一致。復核檢驗機構應按照申報單位提交的檢驗方法進行檢驗并出具復核檢驗報告。
7. 保健食品中原料和輔料應符合《保健食品注冊與備案管理辦法》中原、輔料質量要求的規定,并符合相應的食品國家標準。原料若為植物提取物或者原料及輔料加工過程中使用、間接引入有機溶劑涉及的有機溶劑符合GB 2760《食品安全國家標準 食品添加劑使用標準》附錄C中食品工業用加工助劑使用名單規定,或其他相關標準的要求企業可根據產品質量控制需要,采用本規范中第三部分保健食品中十一種溶劑殘留的測定方法將溶劑殘留檢測列入原料及產品的技術要求。
8針對各類功效的保健食品,需參照本規范第四部分興奮劑及違禁成分測定方法進行非法添加篩查。同時,需進行配方分析,如明確存在原料帶入情況的指標,應檢測相關項目,報出檢測結果,但不作為非法添加結果報送,除結果異常外。
9不同劑型及特定原料類別產品衛生學理化檢驗應包括本規范第五部分中規定的相應檢測項目
10. 保健食品應具有與產品配方和申報的保健功能相適應的功效成分或標志性成分,申報時須提供配方中主要原料所含的功效成分或標志性成分的檢測結果、檢方法及方法學驗證結果第六部分列出了原料類型及相應檢測項目,以所列原料為主的產品須檢測表中規定的項目。
11. 普通食品形態產品應檢測并制定凈含量及允許負偏差指標,需要按照產品質量標準規定規格的最小包裝確定檢測依據,指標應符合《定量包裝商品凈含量計量檢驗規則》(JJF 1070)規定;《中國藥典》“制劑通則”項下有相應要求的產品劑型,應檢測并制定裝量差異或重量差異指標,指標應符合規定。裝量或凈含量只檢測內容物,不包括隔離材料,如膠囊殼等。
12. 最小服用單元含有惰性隔離材料填充的產品,如膠囊,其功效成分或者指標成分、農藥殘留、水分、灰分等指標以去除隔離材料(膠囊殼)的內容物為檢測單元,對于非法添加藥物、重金屬、鉻、色素(如材料帶顏色)等需要進行整體檢測,或者檢測結果明確標識相關檢測部位。
13. 標準規定不得檢出的項目結果,方法定量限以上檢測結果,按照具體檢出值報送結果;方法檢出限以下檢測結果,注明“未檢出,檢出限值”;方法檢出限以上、定量限以下檢測結果,注明“檢出且小于定量限,定量限值,檢出限值”。
14. 注冊檢驗機構應按照國家相關規定和標準等要求,根據樣品具體情況,合理地進行穩定性試驗設計和研究。通過穩定性試驗,考察樣品在不同環境條件下(如溫度、相對濕度等)的感官、化學、物理及生物學特征隨時間增加其變化程度和規律,從而判斷樣品包裝、貯存條件和保質期內的穩定性。產品穩定性重點考察指標,主要包括鑒別、感官、微生物、崩解時限(溶散時限、溶化性等)、水分、pH值、酸價、過氧化值、真菌毒素、列入理化指標中的功效成分/標志性成分等隨儲存條件和儲存時間容易發生變化的指標。產品非穩定性重點考察指標,主要包括灰分、污染物(如鉛、總砷、總汞等)、農殘(如六六六、滴滴涕等)、國家相關標準及現行規定有用量限制的合成色素和甜味劑等隨儲存條件和貯存時間不易發生變化的指標,以及國家相關標準及現行規定有用量限制的抗氧化劑指標。
 

 
 
第二部分
二十五種功效成分和標志性成分
檢驗方法
Testing Methods for 25 kinds of Functional
and Iconic Components
 

一、保健食品中紅景天苷的測定
Determination of salidroside in health food
                                                                               
 
 范圍
本方法規定了以紅景天為主要原料的保健食品中紅景天苷的液相色譜測定方法。
本方法適用于保健品食品中紅景天苷的測定,也適用于保健食品中酪醇的測定。
2   原理
試樣經甲醇超聲提取,以0.01 mol/L 乙酸銨-甲醇為流動相(80+20),采用高效液相色譜法,紫外檢測器檢測,根據保留時間定性,外標法定量。
3  試劑和材料
注:除非另有說明,本方法所用試劑均為分析純,水為 GB/T6682 規定的一級水。
3.1   試劑
3.1.1 乙酸銨( CH3COONH4 ) 
3.1.2 甲醇(CH3OH):色譜純。
3.1.3 甲醇(CH3OH) 
3.2 試劑配制
乙酸銨溶液 (0.01 mol/L):稱取0.77 g乙酸銨,加入適量水溶解,用水定容至1000 mL,經0.45 μm水相微孔濾膜過濾后備用。
3.3 標準品
紅景天苷(C14H20O7):純度≥98%
酪醇(C8H10O2):純度≥98%
3.4 標準溶液的配制
3.4.1  紅景天苷標準儲備液(2.0 mg/mL)  準確稱取紅景天苷標準品0.02 g 10 mL 容量瓶中,用甲醇(3.1.2)溶解并定容至刻度 ,搖勻。
3.4.2   紅景天苷標準工作液:將紅景天苷標準儲備液(3.4.1)用甲醇(3.1.2)稀釋制備一系列標準溶液,標準系列濃度為0mg/mL0.01 mg/mL0.02 mg/mL0.05mg/mL0.20 mg/mL0.50 mg/mL,臨用時配制。
3.4.3   酪醇標準儲備液(2.0 mg/mL)準確取酪醇標準品0.02 g 10 mL 容量瓶中,用甲醇(3.1.2)溶解并定容至刻度 ,搖勻
3.4.4  系統適用性溶液:準確吸取紅景天苷標準儲備液(3.4.1)和酪醇標準儲備液(3.4.3)各0.5mL 10 mL 容量瓶中,用甲醇(3.1.2稀釋至刻度 ,搖勻
4  儀器設備
4.1  高效液相色譜儀: 配有紫外檢測器(UV)。
4.2  超聲波清洗器。
4.3  分析天平:感量0.01 mg0.1 mg
 分析步驟
5.1  試樣制備
5.1.1  固體樣品:取20粒以上片劑或膠囊試樣進行粉碎、混勻,準確稱取適量試樣(約含紅景天苷2.5mg 25 mL 容量瓶中,加入甲醇3.1.3)約20mL超聲提取30 min,放冷至室溫,用甲醇3.1.3定容至刻度。混勻后經0.45 μm濾膜過濾,供液相色譜分析用。
5.1.2  液體樣品:準確吸取適量搖勻后的試樣(約含紅景天苷2.5mg)于25 mL容量瓶,用甲醇3.1.3定容至刻度。混勻后經0.45 μm濾膜過濾,供液相色譜分析用。
5.2  色譜參考條件
5.2.1  色譜柱:C18柱,柱長250mm,內徑4.6mm,填料粒徑5 μm,或同等性能色譜柱;
5.2.2  流動相:乙酸銨溶液(0.01 mol/L-甲醇(80+20);
5.2.3  流速:1.0 mL/min
5.2.4  柱溫:25 
5.2.5  檢測波長:215 nm
5.2.6  進樣量:10 mL
5.2.7  系統適用性試驗:取系統適用性溶液(3.4.4)10 mL,注入液相色譜儀,記錄色譜圖,紅景天苷峰與酪醇峰的分離度應大于1.5。
5.3 標準曲線的制作  
將標準系列工作液(3.4.2)分別注入高效液相色譜儀中,測定相應的色譜峰高或峰面積,以標準工作液的濃度為橫坐標,以峰面積或峰高為縱坐標,繪制標準曲線(標準溶液液相色譜圖見附錄A中圖A.1)。
5.4  試樣溶液的測定
將試樣待測液(5.1.15.1.2)注入液相色譜儀中,以保留時間定性,測得峰面積或峰高,根據標準曲線得到待測液紅景天苷的濃度(樣品溶液液相色譜圖見附錄A中圖A.2)
 分析結果的表述
試樣中紅景天苷含量按式(1)計算:
        ×V
X                × 100        .......................................(1)
        m     
式中: 
X 試樣中紅景天苷的含量,單位為毫克每克或毫克每毫升(mg/100gmg/100mL);  
C由標準曲線查得待測樣液中紅景天苷的濃度,單位為毫克每毫升(mg/mL);
V樣品的定容體積,單位為毫升(mL);
m樣品量,單位為克或毫升(gmL
100單位轉換
計算結果以重復條件下獲得的兩次獨立測定結果的算術平均值表示,保留位有效數字。
 精密度
在重復性條件下獲得的兩次獨立測定結果的絕對差值不超過算術平均值的 10%  
 其他 
當稱樣量為 1 g,定容體積為 25 mL時,紅景天苷的檢出限為50m g/g
 

附錄 A
標準溶液和試樣溶液典型液相色譜圖
A.1 紅景天苷和酪醇標準溶液色譜圖,見圖 A.1
 
 A.1 紅景天苷和酪醇標準溶液(0.1mg/mL)色譜圖
A.2 含有紅景天苷和酪醇的試樣溶液色譜圖,見圖 A.2 
 
 A.2 含有紅景天苷和酪醇的試樣溶液色譜圖

二、保健食品中大蒜素的測定
Determination of allicin in health food
                                                                              
 
1  范圍
本方法規定了保健食品中大蒜素的測定方法。
本方法適用于以大蒜及其加工品為主要原料制成的保健食品中大蒜素的測定。
2  原理
   試樣經有機溶劑提取,通過氣相色譜檢測,以保留時間定性,外標法定量。
3  試劑材料
注:除非另有說明,本方法所用試劑均為分析純。
3.1  試劑
3.1.1  無水乙醇(C2H5OH)。
3.1.2  正己烷(CH3(CH2)4CH3)。
3.1.3  無水硫酸鈉(Na2SO4)
3.2  標準品
    大蒜素(C6H10S3):純度≥99.0%。
3.3  標準溶液配制
3.3.1大蒜素標準儲備液(10.0mg/mL)稱取100.0mg大蒜素標準物質于10mL 容量瓶中,用正己烷定容至刻度,搖勻。此溶液可在冰箱中保存七天。
3.3.2大蒜素標準工作液(1.0mg/mL):吸取大蒜素標準儲備液 1.0mL于 10mL容量瓶中,用正己烷定容至刻度搖勻,得濃度為1.0mg/mL的標準工作液,臨用時配制。
4  儀器
4.1  氣相色譜儀:配有氫火焰離子化檢測器( FID)。
4.2  天平:感量為 0.1 mg 和 0.01 mg。
4.3  超聲清洗器。 
5  分析步驟
5.1 試樣制備
5.1.1  固體試樣
稱取粉碎混合均勻的固體待測試樣適量(含待測組分約5mg,精確到 0.0001 g于5mL容量瓶中,加無水乙醇2.5mL,密塞,超聲20min,取出冷卻至室溫,加正己烷定容,搖勻0.45μm微孔濾膜過濾,待上機測試用
5.1.2  油狀試樣
稱取已混合均勻的油狀待測試樣適量(含待測組分約5mg,精確到 0.0001 g5mL容量瓶中,加正己烷溶解并定容,搖勻,待上機測試用。
5.1.3  含水液體試樣
精密吸取混合均勻的待測試樣適量(含待測組分約10mg),置于分液漏斗中,加5mL正己烷振搖提取1min,靜置分層,取上層清液過無水硫酸鈉,提取兩次。用適量正己烷沖洗無水硫酸鈉,合并至同一10mL容量瓶中,正己烷定容,搖勻待上機測試用。
5.2 色譜參考條件
5.2.1 色譜柱:(5%-苯基)-甲基聚硅氧烷固定相,柱長30m,內徑0.25mm,膜厚0.25μm或其他同等性能色譜柱。
5.2.2柱溫箱溫度: 起始溫度100保持3分鐘, 10/min速度升至150再以20/min速度升至200保持20min。
5.2.3  進樣口溫度:220℃;進樣量μL。
5.2.4  檢測器溫度:250
5.2.5  載氣:高純氮氣,流量1.0mL/min。
5.2.6  氫氣:40mL/min ;空氣:400mL/min。
5.3 測定
 1 μL 的標準溶液(3.3.2)試樣待測液(5. 1)注入氣相色譜儀中,以保留時間定性,測得峰面積或峰高,外標峰面積或峰高法定量(標準溶液圖譜及試樣圖譜見附錄A)
6  分析結果的表述
試樣中大蒜素含量按式(1)計算
  ..........................................(1)
式中:
W—大蒜素的含量,單位為克每百克克每百毫升(g/100gg/100mL)
A1—試樣使用液色譜峰面積或峰高;
A2—標準使用液峰面積或峰高;
C—標準使用液濃度,單位為毫克每毫升( mg/mL)
V—試樣定容體積,單位為毫升( mL)
m—試樣的質量或體積,單位為克或毫升( g或mL);
100—單位轉換;
1000—單位轉換
計算結果以重復條件下獲得的兩次獨立測定結果的算術平均值表示,保留三位有效數字
7 精密度
在重復性條件下獲得的兩次獨立測定結果的絕對差值不超過算術平均值的 10% 。
其他
當固體試樣油狀試樣稱樣量為0.1g,定容體積為5.0mL時,大蒜素的檢出限為0.20g/100g。當液體取樣量為0.2mL,定容體積為10mL時,大蒜素的檢出限為0.22g/100mL

附錄A
標準溶液和試樣溶液典型氣相色譜圖
A.1大蒜素標準溶液色譜圖見圖A.1。
 
 
A.1大蒜素標準溶液色譜圖
A.2含有大蒜素的試樣溶液色譜圖見圖A.2。
 
 A.2含有大蒜素的試樣溶液色譜圖
 
 

三、保健食品中蘆薈苷的測定
Determination of aloin in health food
 
1  范圍
本標準規定了保健食品中蘆薈苷相色譜測定方法。
標準適用于以蘆薈及其加工品為原料的保健食品中蘆薈苷含量的測定。
2  原理
樣品用甲醇+水(55+45)作為溶劑,提取試樣中的蘆薈苷,經液相色譜儀C18 柱分離,在293 nm波長處檢測,以蘆薈苷保留時間定性,峰面積定量。
3  試劑和材料
注:除非另有說明,本方法所用試劑均為分析純,水為 GB/T6682 規定的一級水。
3.1 試
3.1.1 甲醇(CH3OH):色譜純。
3.1.2 石油醚:沸程30~60
3.2 標準品
蘆薈苷標準品(C21H22O9)
3.3 標準溶液的配制
3.3.1 蘆薈苷標準儲備溶液稱取10.0mg蘆薈苷標準品于25 mL 容量瓶中,加流動相溶解并定容至刻度,搖勻
3.3.2 蘆薈苷標準工作液:分別吸取蘆薈苷標準儲備溶液0.mL、1.mL、2.mL、4.mL、6.0 mL至10 mL容量瓶中,用流動相定容得濃度為20 μg/mL、40 μg/mL、80 μg/mL、160 μg/mL、240 μg/mL的標準工作液。
4  儀器設備
4.1  高效液相色譜儀:紫外檢測器或二極管陣列檢測器。
4.2  超聲波清洗器
4.3  分析天平:感量1 mg,0.1 mg
4.4 離心機:轉速≥3000 r/min。
4.5 微孔濾膜:0.45 μm
5  分析步驟
5.1 試樣制備
5.1.1 固體試樣
稱取已粉碎混合均勻的待測試樣1 g(精確到 0.001 g),置具塞錐形瓶中,加入50.0 mL流動相,稱重,超聲處理10 min,放冷,用流動相補足減失的重量搖勻,經0.45 μm微孔濾膜過濾,濾液待測。必要時可進行適當稀釋。
5.1.2含油基質試樣 
稱取混合均勻的待測試樣1 g(精確到 0.001 g),置具塞錐形瓶中,加入25.0 mL石油醚,渦旋使充分混勻,過濾,棄去石油醚液,再用少量石油醚洗滌錐形瓶及濾紙,揮干,將濾紙和殘渣置于原具塞錐形瓶中,加入50.0 mL流動相,稱重,超聲處理10 min,放冷,用流動相補足減失的重量搖勻,經0.45 μm微孔濾膜過濾,濾液待測。必要時可進行適當稀釋。
5.1.3 水性液體試樣
吸取待測試樣,必要時以流動相適當稀釋,離心,取上清液經0.45 μm微孔濾膜過濾。
5.2色譜參考條件
5.2.1 色譜柱C18柱,柱長250 mm,內徑4.6 mm,粒徑5 μm,或同等性能的色譜柱。
5.2.2流動相:甲醇+水=55+45。
5.2.3流速:1 mL/min。
5.2.4柱溫:40
5.2.5檢測波長:293 nm。
5.2.6進樣量10 μL。
5.3 標準曲線的制作
標準系列各濃度溶液(3.3.2),注入液相色譜儀中,測得相應的峰面積以標準工作液的濃度為橫坐標,以峰面積為縱坐標,繪制標準曲線(標準溶液液相色譜圖見附錄A中圖A.1 )。
5.4 試樣溶液的測定
將試樣溶液(5.1.1、5.1.2、5.1.3)注入液相色譜儀,以保留時間定性,同時記錄峰面積,根據標準曲線得到待測液中蘆薈苷的濃度(樣品溶液相色譜圖見附錄A中圖A.2)。
6  結果計算
試樣中蘆薈苷含量按(1)計算
       Ci×V ×100
X                  ..........................................(1)
        1000
式中:
Xi    試樣中蘆薈苷含量,單位為克每百克(g/100 g)或克每百毫升(g/100 mL)
Ci——由標準曲線查得測定樣液中蘆薈苷的濃度,單位為毫克每毫升mg/mL);
V    被測定樣液的最終定容體積,單位為毫升mL);
m    試樣的稱樣質量,單位為克(g)或毫升(mL)
100——單位轉換
1000——單位轉換。
計算結果以重復條件下獲得的兩次獨立測定結果的算術平均值表示,保留位有效數字。
7  精密度
在重復性條件下獲得的兩次獨立測定結果的絕對差值不超過算術平均值的 10% 。
8 其他
當稱樣量為1 g,定容體積為50 mL時,蘆薈苷的定量限為0.0046g/100g。

附錄 A 
標準溶液和試樣溶液典型相色譜圖
A.1 蘆薈苷標準溶液色譜圖,見圖 A.1 
 
 A.1 蘆薈苷標準溶液色譜圖
A.2 含有蘆薈苷的試樣溶液色譜圖,見圖 A.2 
 
 A.2 含有蘆薈苷的試樣溶液色譜圖
 
 

四、保健食品中肉堿的測定
Determination of carnitine in health food
 
1范圍
本方法規定了保健食品中肉堿的液相色譜測定方法。
本方法適用于以肉堿為主要原料的保健食品中肉堿的測定。
2原理
試樣中的肉堿以0.5mmol/L的鹽酸溶液經超聲提取,反相色譜分離,以標準品的保留時間定性,外標法定量。
3試劑和材料
注:除非另有說明,本方法所用試劑均為分析純,水為GB/T 6682規定的一級水。
3.1  試劑
3.1.1 磷酸氫二鉀(K2HPO4)
3.1.2 辛烷磺酸鈉(C8H19NaO3S)
3.1.3 鹽酸(HCl)。
3.1.4 磷酸(H3PO4)。
3.1.5硅藻土(SiO2):化學純。
3.1.6乙腈(C2H3N):色譜純
3.2  試劑配制
3.2.1  鹽酸溶液(0.50 mmol/L):吸取4.2mL鹽酸,用水稀釋并定容至100mL。再吸取上述溶液1mL,用水稀釋并定容至1L。
3.2.2  緩沖鹽溶液:分別稱取8.7g磷酸氫二鉀和0.4325g辛烷磺酸鈉,用水溶解并稀釋至1L,用磷酸調至pH2.5。
3.3  標準品
肉堿(C7H15NO3):純度≥98%,或經國家認證并授予標準物質證書的標準物質。
3.4  標準溶液配制
3.4.1 肉堿標準儲備液(1.0mg/mL):精密稱取肉堿標準品25 mg精確到0.1mg)于25 mL容量瓶中,用鹽酸溶液溶解并定容至刻度,搖勻。
3.4.2 肉堿標準工作液:分別準確吸取肉堿標準儲備液0.50 mL、1.0 mL、2.0 mL、3.0 mL、4.mL、5.0 mL于5 mL容量瓶中鹽酸溶液稀釋至刻度,得濃度為0.10 mg/mL、0.20 mg/mL、0.40 mg/mL、0.60 mg/mL、0.80 mg/mL、1.0 mg/mL的標準工作液。
4儀器
4.1  高效液相色譜儀:配有紫外(UV)檢測器或二極管陣列(DAD)檢測器
4.2  天平:感量 0.1mg0.01mg
4.3  超聲波提取器。
5分析步驟
5.1  試樣制備
5.1.1  試樣處理
5.1.1.1 固體試樣
稱取粉碎并混合均勻的試樣0.1 g~2 g (精確0.001g)(待測組分5 mg~50 mg),于50mL容量瓶中,加入鹽酸溶液約35mL,超聲提取10min,放冷,鹽酸溶液稀釋至刻度,混勻,過濾,棄初濾液數毫升,收集濾液,過0.45μm水相濾膜,取續濾液待測
5.1.1.2 軟膠囊試樣
取試樣剪開,擠出內容物混勻,稱取0.1 g~2 g(精確到0.001g)加入等量硅藻土,研至分散均勻,稱取其中部分(精確到0.001g含待測組分約5 mg~50 mg),轉移至250 mL具塞三角瓶中,并吸取鹽酸溶液50mL,并入三角瓶中,稱重,加塞超聲提取10 min,放冷,鹽酸溶液補足重量,混勻,過濾,棄初濾液數毫升,收集濾液,過0.45 μm水相濾膜,取續濾液待測。
5.1.1.3 液體試樣
精密量取混勻后的試樣1.0 mL~5.0 mL (含待測組分5 mg~50 mg),于50 mL容量瓶中加入鹽酸溶液約35 mL,超聲提取10 min,放冷,鹽酸溶液稀釋至刻度,混勻,過濾,棄初濾液數毫升,收集濾液,過0.45 μm水相濾膜,取續濾液待測
5.1.2  稀釋
根據試樣中肉堿含量用鹽酸溶液進行適當的稀釋(F),使待測溶液中肉堿的濃度在0.10 mg/mL~ 1.0 mg/mL
5.2  色譜參考條件
5.2.1 色譜柱:C18柱:4.6×250mm,5μm或同等性能的色譜柱。
5.2.2 流動相:緩沖鹽溶液+乙睛=90+10。
5.2.3 流速:0.8mL/min。
5.2.4 檢測波長:210nm。
5.2.5 進樣量:20μL
5.3  標準曲線的制作
將肉堿標準工作液(3.4.2)從低濃度到高濃度分別注入高效液相色譜儀中,測定相應的峰面積。以標準工作液的濃度為橫坐標,以峰面積為縱坐標,繪制標準曲線(標準溶液液相色譜圖見附錄A中圖 A.1 )
5.4待測溶液的測定
在相同色譜條件下,將待測溶液(5.1.1.1、5.1.1.2、5.1.1.3、5.2.1)注入高效液相色譜儀中,以保留時間定性,測得峰面積,根據標準曲線計算待測溶液中肉堿的濃度(待測溶液液相色譜圖見附錄A中圖A.2)。
6  分析結果的表述
試樣中肉堿含量按式(1)計算:
...................................(1)
式中:
X——試樣中肉堿的含量,固態試樣單位為克每百克(g/100g),液態試樣單位為克每百毫升(g/100mL);
ρ——根據標準曲線計算待測溶液中肉堿的濃度單位為毫克每毫升(mg/mL)
V——試樣稀釋體積單位為毫升(mL);
m——試樣取樣質量單位為克(g);試樣取樣體積,單位為毫升(mL);
F——稀釋倍數;
100——單位轉換;
1000——單位轉換。
計算結果以重復條件下獲得的兩次獨立測定結果的算術平均值表示,保留三位有效數字。
7  精密度
在重復性條件下獲得的兩次獨立測定結果的絕對差值不得超過算術平均值的5%。
 其他
當稱樣量為2.0 g,定容體積為50mL時,肉堿的定量限為0.10 g/100g
當取樣量為5.0mL,定容體積為50mL時,肉堿的定量限為0.040 g/100mL

附錄 A
標準溶液和待測溶液典型相色譜圖
A.1 肉堿標準溶液色譜圖,見圖 A.1。
 
A.1 肉堿標準溶液色譜圖
A.2 含有肉堿的待測溶液色譜圖,見圖A.2

A.2 含有肉堿待測溶液色譜圖

附錄 A
標準溶液和待測溶液典型相色譜圖
A.1 肉堿標準溶液色譜圖,見圖 A.1。
 
A.1 肉堿標準溶液色譜圖
A.2 含有肉堿的待測溶液色譜圖,見圖A.2
 
A.2 含有肉堿待測溶液色譜圖

五、保健食品中α-亞麻酸、γ-亞麻酸的測定
Determination of α, γ-linolenic acids in health food
 
1  范圍
本方法規定了保健食品中α-及γ-亞麻酸的測定方法。
本方法適用于油脂保健食品中α-及γ-亞麻酸含量的測定。
本方法還適用于油脂保健食品中C16~C22不飽和脂肪酸和角鯊烯含量的測定。
2  原理
將油脂試樣(或試樣提取的脂肪),經氫氧化鉀皂化,在三氟化硼存在下甲醇酯化,然后用氣相色譜儀分析,采用外標法定量。
3  試劑和材料
注:除非另有說明,本方法所用試劑均為分析純,水為 GB/T6682 規定的一級水。
3.1 試劑
3.1.1正己烷C6H14
3.1.2 氫氧化鉀( KOH)。
3.1.3三氟化硼乙醚溶液。
3.1.4 甲醇(CH3OH):色譜純。
3.1.5 氯化鈉(NaCl)
3.2 試劑配制
3.2.1氫氧化鉀甲醇溶液 (0.5 mol/L):稱取2.8 g氫氧化鉀,用甲醇溶解并定容至 100 mL,混勻。
3.2.2三氟化硼甲醇溶液(1+4):取40%三氟化硼乙醚溶液1份,加甲醇4份,混勻即可。
3.2.3飽和氯化鈉:飽和氯化鈉溶液:稱取360g氯化鈉溶解于1.0L水中,攪拌溶解,澄清備用。
3.3.1 α-亞麻酸甲酯>99.0%。
3.3.2 γ-亞麻酸甲酯>99.0%。
3.3 標準溶液的配制
3.4.1 標準儲備液(1.0 mg/mL):分別取25.0mg α-亞麻酸甲酯及25.0mg γ-亞麻酸甲酯標準品,于25mL容量瓶中用正已烷溶解并定容至刻度搖勻此溶液應貯存于-18°C 冰箱中。
3.4.2 標準使用液(0.5 mg/mL):分別吸取α-亞麻酸甲酯及γ-亞麻酸甲酯標準儲備液各5.0mL于10mL的容量瓶中,混勻, 臨用時配制。
4  儀器設備
4.1氣相色譜儀,附氫火焰(FID)檢測器。
4.2分析天平:感量0.1mg、1mg
4.3加熱式磁力攪拌器。
4.4標準磨口燒瓶(50mL)和直形冷凝管。
5  分析步驟
5.1試樣制備
5.1.1脂肪的提取 按GB 5009.6中規定的方法提取。
5.1.2皂化
稱取0.100g油脂(或脂肪)和磁力攪拌子一并放入50mL磨口燒瓶中(見圖1),加入4mL0.5mol/L氫氧化鉀甲醇溶液,上部連接回流冷凝管,并固定于磁力攪拌器上,由冷凝管上口向溶液中導入氮氣;使反應瓶中始終充滿氮氣。開啟磁力攪拌器,并加熱使反應液保持65±5,攪拌回流約15min。
5.1.3甲脂化
從冷凝管上部加入4mL三氟化硼甲醇溶液,攪拌(65±5),回流約2min,冷至室溫, 從冷凝管上部加入5mL正己烷繼續攪拌5min,移去冷凝管,加入5mL飽和氯化鈉水溶液, 搖動數分鐘,轉移至25mL分液漏斗中分離水與有機相,再加3mL正己烷洗水相,分離,棄水相,合并有機相并用正己烷定容至10.0mL(濃度低時吹氮濃縮至1.0mL)。供測定用。
5.2氣相色譜參考條件
5.2.1色譜柱:FFAP(改性聚乙二醇20M,30m×0.25mmi.d.0.25μm)
5.2.2 柱箱溫度:215
5.2.3進樣口溫度:250
5.2.4檢測器溫度:260
5.2.5氮氣:50mL/min,30:1分流;氫氣:45mL/min;空氣:500mL/min。
5.3定性分析
在上述儀器條件下,分別取標準使用液和試樣測定液1.0μL,注入氣相色譜儀,以保留時間來確定α-及γ-亞麻酸甲酯
5.4定量分析
試樣中α-亞麻酸甲酯或γ-亞麻酸甲酯色譜峰面積或峰高與標準的比較定量。
6  分析結果的表述
試樣中α-亞麻酸甲酯或γ-亞麻酸測定結果按(1)式計算
6.1計算
 
                                       
                                     ..........................................(1)
式中
X—α-亞麻酸或γ-亞麻酸含量,%;
A1—試樣中α-亞麻酸甲酯或γ-亞麻酸甲酯色譜峰面積或峰高;
A2—標準使用液色譜峰面積或峰高;
ρ—標準使用液濃度,mg/mL;
v—正己烷定容體積,mL; 
m—試樣質量,g;
0.952—亞麻酸換算系數。
脂肪試樣再換算原保健食品試樣中γ-亞麻酸和α-亞麻酸的量。
計算結果以重復條件下獲得的兩次獨立測定結果的算術平均值表示,保留位有效數字。
7  精密度
在重復性條件下獲得的兩次獨立測定結果的絕對差值不超過算術平均值的 10% 。
8 其他
本方法最低檢出量:γ-亞麻酸為0.050μg、α-亞麻酸為0.030μg。
 
圖 1皂化酯化裝置圖

附錄 A
標準溶液和試樣溶液典型氣相色譜圖
A.1 α-亞麻酸甲酯標準溶液色譜圖,見圖 A.1 
 
圖 A.1 γ-亞麻酸甲酯 α-亞麻酸甲酯標準溶液色譜圖
A.2 含有α-亞麻酸甲酯的試樣溶液色譜圖,見圖 A.2 
 
 A.2 含有α-亞麻酸甲酯的試樣溶液色譜圖

六、保健食品中人參皂苷的測定
Determination of ginsenosides in health food
                                                                                 
 
1  范圍
本方法規定了保健食品中人參皂苷的高效液相色譜測定方法。
本方法適用于以人參及其加工品為主要原料的保健食品中人參皂苷ReRg1Rb1RcRb2Rd含量的測定。
2  原理
將試樣中的人參皂苷溶解、提取,經凈化處理后,使用梯度洗脫反相高效液相色譜進行分離,紫外檢測器檢測,根據色譜峰的保留時間定性,外標法定量。
3  試劑和材料
注:除非另有說明,本方法所用試劑均為分析純,水為GB/T 6682規定的一級水。
3.1  試劑
3.1.1 乙腈(CH3CN):色譜純。
3.1.2 甲醇(CH3OH)
3.1.3  D101大孔吸附樹脂。
3.2  標準品
人參皂苷ReRg1Rb1RcRb2Rd:純度≥98%,或經國家認證并授予標準物質證書的標準物質。
3.3 標準溶液的配制
3.3.1 人參皂苷ReRg1Rb1RcRb2Rd標準儲備液(10mg/mL):分別稱取人參皂苷ReRg1Rb1RcRb2Rd標準品100mg610.0mL容量瓶中,用甲醇溶解并定容至刻度,搖勻。
3.3.2 人參皂苷ReRg1Rb1RcRb2Rd混合標準工作液:分別吸取人參皂苷ReRg1Rb1RcRb2Rd標準儲備液0.10mL0.20mL0.40mL0.80mL1.00mL10.0mL容量瓶中,用甲醇定容,得濃度為0.10mg/mL0.20 mg/mL0.40 mg/mL0.80 mg/mL1.00 mg/mL的混合標準工作液。
4  儀器設備
4.1  高效液相色譜儀:附紫外檢測器。
4.2  超聲波清洗器。
4.3  離心機。
4.4  水浴鍋。
4.5  分析天平:感量1mg0.1mg
5  分析步驟
5.1  試樣制備
5.1.1 固體試樣
取試樣研成粉末,并過20目篩。稱取該粉末樣適量(相當于含總人參皂苷約75mg,精確至0.001g),于50mL容量瓶中,加水45mL于超聲波清洗器中超聲提取30分鐘,取出,待放至室溫后,加水定容至刻度,搖勻,濾過,準確吸取續濾液10mL,通過D101大孔吸附樹脂凈化柱(大孔吸附樹脂使用前先經甲醇浸泡,水洗,裝成10cm長,直徑1~1.5 cm的小柱),小柱先用10mL水沖洗,棄去水液之后,用70%甲醇25mL洗脫皂苷,收集甲醇溶液,水浴上蒸干,殘渣以甲醇溶解并定容至5.0mL,該樣液離心后過0.45μm膜,濾液進行色譜分析。
5.1.2 液體試樣
取一定量的試樣(相當于含總人參皂苷約75mg),于水浴上蒸干,殘渣以50mL水超聲提取30分鐘,余下步驟與5.1.1相同。
5.2 色譜參考條件
5.2.1 色譜柱: C18柱,4.6 x 250 mm5μm或同等性能的色譜柱。
5.2.2檢測波長 203nm
5.2.3 柱溫:35°C
5.2.4 進樣量:5μl。
5.2.5 流動相:A相為乙腈,B相為水。
梯度洗脫條件
時間(min
A相(%)
B相(%)
流速(mL/min
0
16
84
1.0
20
18
82
1.0
55
40
60
1.0
65
40
60
1.0
66
100
0
1.0
71
100
0
1.0
72
16
84
1.0
85
16
84
1.0
5.3  標準曲線的制作
5μL的混合標準工作液注入液相色譜儀中,測定相應的峰面積或峰高,以標準工作液的濃度為橫坐標,以峰面積或峰高為縱坐標,繪制標準曲線(標準溶液液相色譜圖見附錄A)
5.4  試樣溶液的測定
5μL的試樣待測液注入液相色譜儀中,以保留時間定性,測得峰面積或峰高,根據標準曲線得到待測液人參皂苷ReRg1Rb1RcRb2Rd的濃度。
6  分析結果的表述
試樣中各人參皂苷的含量按式(1)計算:
                              ………………(1)
式中:
Xi——試樣中各人參皂苷的含量,單位為克每百克或克每百毫升(g/100g或g/100mL);
Ci——由標準曲線查得測定樣液中各人參皂苷的濃度,單位為毫克每毫升(mg/mL);
V——被測定樣液的最終定容體積,單位為毫升(mL);
F——被測定樣液的稀釋倍數;
m——試樣的取樣量,單位為克或毫升(g或mL);
100——單位轉換;
1000——單位轉換。 
試樣中總人參皂苷的含量按式(2)計算:
XXReXRg1XRb1XRcXRb2XRd………………(2)
式中:
X試樣中總人參皂苷的含量,單位為克每百克或克每百毫升(g/100g或g/100mL);
Xi試樣中各人參皂苷(Xi包括人參皂苷ReRg1Rb1RcRb2Rd)的含量,單位為克每百克或克每百毫升(g/100g或g/100mL)
計算結果以重復條件下獲得的兩次獨立測定結果的算術平均值表示,保留三位有效數字。 
7  精密度
在重復性條件下獲得的兩次獨立測定結果的絕對差值不超過算術平均值的10% 
其他 
本方法中六種人參皂苷的最低檢出量為10 mg/kg
本方法中六種人參皂苷的最佳線性范圍:0.1mg/mL~1mg/mL。
 

附錄A
 
標準溶液典型液相色譜圖
A.1 人參皂苷Rg1、Re、Rb1、Rc、Rb2、Rd的標準溶液色譜圖,見圖A.1。
 
A.1 人參皂苷Rg1ReRb1RcRb2Rd的標準溶液色譜圖
 
A.2 人參皂苷Rg1、Re、Rb1、Rc、Rb2、Rd的樣品溶液色譜圖,見圖A.2。
 
A.2 人參皂苷Rg1ReRb1RcRb2Rd的樣品溶液色譜圖
 

七、保健食品中原花青素的測定
Determination of procyanidins in health food
                                                                                 
1  范圍
本方法規定了保健食品中原花青素的測定方法。
本方法適用于保健食品中原花青素的含量測定。
 
2  原理
原花青素是含有兒茶素和表兒茶素單元的聚合物。原花青素本身無色,但經過熱酸處理后,可以生成深紅色的花青素離子。本法用分光光度法測定原花青素在水解過程中生成的花青素離子。計算試樣中原花青素含量。
 
3  試劑和材料
注:除非另有說明,本方法所用試劑均為分析純,水為 GB/T6682 規定的一級水。
3.1 試劑
3.1.1 甲醇(CH3OH)
3.1.2 正丁醇(CH3(CH2)3OH)
3.1.3 鹽酸(HCl)
3.1.4 硫酸鐵銨(NH4Fe(SO42·12H2O)
3.2 試劑配制
3.2.1鹽酸2 mol/L):取鹽酸90mL,加水適量使成500mL,搖勻。
3.2.2 硫酸鐵銨溶液:稱取10g硫酸鐵銨,用2 mol/L鹽酸溶解并定容至500mL,混勻,此溶液中硫酸鐵銨濃度為2%(w/v)
3.3 標準品
原花青素(葡萄籽來源),純度95%。
3.4 標準品溶液的配制
原花青素標準儲備液(1.0 mg/mL):稱取10 mg(精確至0.1 mg)原花青素標準品于10 mL 容量瓶中,用甲醇溶解并定容至刻度,搖勻。
4  儀器
4.1   天平:感量為 1 mg  0.1 mg
4.2  分光光度計。
4.3  離心機:轉速 ≥4000 r/min。
4.4  超聲儀。
4.5  回流裝置。
5  分析步驟
5.1 試樣制備
5.1.1 固體試樣稱取已粉碎混合均勻的待測試樣50 mg~100 mg(精確至0.1 mg),置于50 mL容量瓶中,加入30 mL甲醇,超聲處理20 min,放冷至室溫后,加甲醇至刻度,搖勻,離心或放置至澄清后取上清液備用。
5.1.2 含油試樣稱取混合均勻的待測試樣50 mg(精確至0.1 mg),置于小燒杯中,用20 ~30mL甲醇分數次攪拌,將提取液轉移至50 mL容量瓶中,直至甲醇提取液無色,加甲醇至刻度,搖勻。
5.1.3 液體試樣:吸取不超過1 mL的待測試樣,置于50 mL容量瓶中,加甲醇至刻度,搖勻。
5.2 試樣測定
將正丁醇與鹽酸按95:5的體積比混合后,取出6.0 mL置于具塞錐瓶中,再加入0.2 mL硫酸鐵銨溶液和1.0 mL試樣溶液,混勻,置沸水浴回流,精確加熱40 min后,立即置冰水中冷卻,在加熱完畢15 min后,于546 nm波長處測吸光度,由標準曲線計算試樣中原花青素的含量。顯色在1小時內穩定。
5.3 標準曲線制備
分別吸取原花青素標準儲備液0 mL、0.1 mL、0.25 mL、0.5 mL、1.0 mL、1.5 mL置于10 mL容量瓶中,加甲醇至刻度,搖勻。各取1.0mL測定與試樣測定方法相同。繪制原花青素濃度與吸光度關系的標準曲線。
6  分析結果表述
試樣中原花青素測定結果按(1)式計算
          C×V×1000
X= ———————————×100………………..(1)
m×1000×1000
 
式中:  X—試樣中原花青素的含量, g/100g;
        C由標準曲線上查出待測試樣中原花青素濃度,μg/mL; 
        V待測試樣定容總體積 mL;
        m—試樣質量,g。
計算結果保留三位有效數字。
7  技術參數
精密度:在重復性條件下獲得的兩次獨立測定結果的絕對差值不超過算術平均值的10%
8 其他
本方法的定量限0.2mg/g。
 

八、保健食品中核苷酸的測定
Determination of nucleotide in health food
 
1  范圍
本方法規定了保健食品中核苷酸的高效液相色譜測定方法。
本方法檢出限:胞嘧啶核苷(CMP)0.04μg/ mL、脲嘧啶核苷(UMP)0.05μg/ mL、腺嘌呤核苷(AMP)0.05μg/ mL、鳥嘌呤核苷(GMP)0.06μg/ mL。
本方法線性范圍:胞嘧啶核苷(CMP)0.992~12.4μg/ mL、脲嘧啶核苷(UMP)1.17~14.6μg/ mL、腺嘌呤核苷(AMP)1.01~12.6μg/ mL、鳥嘌呤核苷(GMP)0.948~12.3μg/ mL。
2  原理
將試樣溶解、去除蛋白后,使用氨基固相萃取柱對核苷酸進行凈化富集,根據高效液相色譜紫外檢測器在254nm處的響應進行定性定量。
3  試劑
注:除特殊說明,所用試劑均為分析純,實驗用水符合GB/T 6682-2008一級水要求。
3.1  甲醇(CH3OH):優級純。
3.2  乙酸:含C2H4O2應為36%~37%(g/g)。
3.3  磷酸二氫鉀KH2PO4
3.4  磷酸氫二鉀K2HPO4
3.5  季銨鹽固相萃取柱。
3.6  核苷酸標準儲備溶液:準確稱量經100干燥4h處理的標準品胞嘧啶核苷(CMP)100mg,脲嘧啶核苷(UMP)、腺嘌呤核苷(AMP)、鳥嘌呤核苷(GMP)各40mg至100mL容量瓶中,加水溶解并定容至刻度 。
3.7  核苷酸標準使用液:將核苷酸標準儲備溶液用0.25mol/L,pH=3的磷酸二氫鉀溶液稀釋100倍。
4  儀器設備
4.1 天平:感量為 1 mg  0.1 mg
4.2 高效液相色譜儀(附二極管陣列或紫外檢測器)
5  分析步驟
5.1  試樣處理
5.1.1  稱取試樣適量(相當于含核苷酸約6.5mg,精確至0.001g),于100mL容量瓶中,加入約50熱水80mL,徹底混勻。當試樣液達到室溫后用水定容至刻度。
5.1.2  準確吸取10mL試樣溶液至100mL容量瓶中,加入0.5%乙酸5mL、水10mL,混勻后靜置5min以沉淀蛋白。用水定容至刻度,混勻后過濾,棄去數毫升初濾液后收集約30mL濾液。
5.1.3  將季銨鹽固相萃取柱先用10mL甲醇、10mL水活化后,再將20mL試樣濾液過濾,以1mL水清洗萃取柱,用0.25mol/L,pH=3.5磷酸二氫鉀溶液洗脫出5mL濾液。全部過程需要控制流速1滴/秒。
5.2  液相色譜參考條件
5.2.1 色譜柱: C18 柱 3.9×150mm,5μm或同等性能色譜柱
5.2.2 柱溫:25
5.2.3檢測波長 254nm。
5.2.4 流動相:0.01mol/L磷酸二氫鉀—0.1mol/L磷酸氫二鉀=480:20。
5.2.5 流速:0.6mL/min。
5.2.6 進樣量:10mL。
5.2.7色譜分析:量取10μL標準溶液及試樣溶液注入色譜儀中,以保留時間定性,以試樣峰高或峰面積與標準比較定量。
5.3  標準曲線的制備:分別配制濃度為1.0、2.0、5.0、10.0、16.0μg/mL的4種核苷酸標準溶液,在給定的儀器條件下進行液相色譜分析,以峰高或峰面積對濃度作標準曲線。
6.結果計算
式中:
X—試樣中核苷酸的含量,mg/100g;
h1—試樣峰高或峰面積;
C—標準溶液濃度,μg/mL;
K—稀釋倍數;
h2—標準溶液峰高或峰面積;
m—試樣量,g。
試樣中總核苷酸的含量為胞嘧啶核苷(CMP)、脲嘧啶核苷(UMP)、腺嘌呤核苷(AMP)、鳥嘌呤核苷(GMP)含量之和。
檢測結果保留三位有效數字。
7.技術參數
在重復性條件下,獲得的兩次獨立測定結果的絕對差值不超過算術平均值的10%

、保健食品中洛伐他汀的含量測定
Determination of lovastatin in health food
 
1  范圍
本方法規定了保健食品中洛伐他汀的液相色譜測定方法。
本方法適用于以紅曲及其加工品為原料的保健品食品中內酯(閉環)洛伐他汀及酸式(開環)洛伐他汀的測定。
2  原理
試樣經75% 乙醇溶液超聲提取,采用液相色譜分離內酯(閉環)及酸式(開環)洛伐他汀,紫外檢測器檢測,以保留時間定性,外標法定量。
3  試劑和材料
注:除非另有說明,本方法所用試劑均為分析純,水為 GB/T6682 規定的一級水。
3.1 試劑
3.1.1  甲醇(CH3OH):色譜純
3.1.2  無水乙醇(CH3CH2OH)。
3.1.3  磷酸(H3PO4)。
3.1.4  氫氧化鈉(NaOH)
3.1.5  鹽酸(HCl):質量分數約37 %。
3.2 試劑配制
3.2.1  75% 乙醇(v/v):將無水乙醇和水按75+25的體積比混合均勻
3.2.2  0.2 mol/L氫氧化鈉溶液:稱取氫氧化鈉1.6g,加水使溶解成200ml,即得。
3.2.3  0.2 mol/L鹽酸溶液:吸取鹽酸1.8ml,加水適量使成100ml,即得。
3.3 標準品
洛伐他汀(C24H36O5):CAS編號75330-75-5,純度≥98%。
3.4 標準溶液的配制
3.4.1  洛伐他汀標準儲備液(400 μg/mL):準確稱取洛伐他汀標準品40 mg精確至0.01 mg),75% 乙醇溶解并定容至100 mL
3.4.2  洛伐他汀標準系列工作液:用流動相稀釋配制濃度為 8.0 μg/mL、20 μg/mL、40 μg/mL、80 μg/mL、160 μg/mL、320 μg/mL 的系列標準工作液
3.4.3  定性用酸式(開環)洛伐他汀溶液:稱取洛伐他汀(內酯)標準品4mg,0.2mol/L氫氧化鈉溶液定容至100 mL50條件下超聲轉化1h,放置到室溫后再放置1h,用0.2mol/L 鹽酸溶液調節pH至中性。
4  儀器設備
4.1  高效液相色譜儀:附二極管陣列或紫外檢測器(UV)。
4.2  分析天平感量為 1 mg 和 0.01 mg。
4.3  超聲波清洗器。
4.4  渦旋混合器。
4.5  離心機:轉速≥3500 r/min
5  分析步驟
5.1 試樣制備
試樣粉碎并混合均勻,稱取試樣適量(相當于含洛伐他汀約5 mg,精確至0.001g,置具塞錐形瓶中,精密加入50 mL 75%乙醇,密塞,稱定重量,超聲提取60 min,放冷,再稱定重量,用75% 乙醇補足減失的重量搖勻以3500 r/min 的轉速離心10 min取上清液經0.45 μm微孔濾膜過濾,濾液作為試樣待測液。
5.2色譜參考條件
5.2.1  色譜柱:C18柱,4.6×250 mm,5 μm或同等性能色譜柱。
5.2.2  柱溫:室溫
5.2.3  檢測波長:238 nm
5.2.4  流動相甲醇++磷酸=385+115+0.14。
5.2.5  流速:1.0 mL/min。
5.2.6  進樣量:10 μL。
5.3 標準曲線的制作
10 μL的標準系列工作液分別注入液相色譜儀中,測得相應的峰面積,以標準系列工作液的濃度(μg/mL)為橫坐標,以峰面積為縱坐標,繪制標準曲線。
5.4 試驗溶液的測定
將10 μL 試樣待測液注入液相色譜儀中,以保留時間定性,測定被測組分峰面積,根據標準曲線得到待測液中內酯型(閉環)洛伐他汀或酸式(開環)洛伐他汀的濃度(μg/mL)。
6  分析結果的表述
6.1  試樣中內酯型(閉環)洛伐他汀或酸式(開環)洛伐他汀的含量分別按式(1)計算
    ………………(1)
式中
Xi——試樣中內酯型(閉環)洛伐他汀或酸式(開環)洛伐他汀的含量,單位為克每百克(g/100g) 
Ci——被測定樣液中內酯型(閉環)洛伐他汀或酸式(開環)洛伐他汀的濃度,單位為微克每毫升(μg/mL) 
V——被測定樣液的最終定容體積,單位為毫升( mL)
m——試樣的稱樣質量,單位為克( g)
100——單位轉換
1000——單位轉換。
6.2  試樣中內酯型(閉環)洛伐他汀酸式(開環)洛伐他汀的總含量按式(2)計算
    ………………(2)
式中
X——試樣中內酯型(閉環)洛伐他汀和酸式(開環)洛伐他汀的總含量,單位為克每百克(g/100g) 
X1——試樣中內酯型(閉環)洛伐他汀含量,單位為克每百克(g/100g) 
X2——試樣中酸式(開環)洛伐他汀含量,單位為克每百克(g/100g)
計算結果以重復條件下獲得的兩次獨立測定結果的算術平均值表示,保留三位有效數字。
7  精密度
在重復性條件下獲得的兩次獨立測定結果的絕對差值不超過算術平均值的 10% 。
8 其他
當稱樣量為 0.5 g,定容體積為 50 mL時,洛伐他汀的定量限為0.040 g/100g。
 
 
 
 
 
 

附錄A 
標準溶液和試樣溶液典型液相色譜圖
 
A.1內酯型(閉環)洛伐他汀標準溶液色譜圖,見圖A.1。
 
 
圖A.1  內酯型(閉環)洛伐他汀標準溶液色譜圖
 
A.2酸式(開環)洛伐他汀標準溶液色譜圖,見圖A.2。
 
圖A.2  酸式(開環)洛伐他汀標準溶液色譜圖
 
A.3含有洛伐他汀的試樣溶液色譜圖,見圖A.3。
 
 
圖A.3  含有洛伐他汀的試樣溶液色譜圖
 

、保健食品中植物類功效成分鑒別試驗方法
Distinguish method of plant function component in health food
 
范圍
本方法規定了保健食品中人參、西洋參、陳皮、甘草、大黃、銀杏葉、蘆薈、葛根等植物類功效成分的鑒別方法。
本方法適用于保健食品中人參、西洋參、陳皮、甘草、大黃、銀杏葉、蘆薈、葛根等植物類功效成分的鑒別。
  陳皮
1  供試液制備
1.1 片劑或膠囊  稱取研細的試樣2 g,加甲醇20 mL,水浴上回流20 min或超聲處理15 min,濾過,取濾液10 mL,濃縮至干,殘渣加甲醇1 mL使溶解作為供試品溶液。
1.2糖塊:取本品30 g,加30 mL水使溶解,用稀鹽酸調節pH至5~6,以水飽和的正丁醇提取3次(25 mL、25 mL、20 mL)合并正丁醇提取液,用水洗滌兩次(30 mL、30 mL)取正丁醇液的1/3量置水浴上蒸干,殘渣加甲醇1 mL使溶解,作為供試品溶液。
2  對照液制備
取陳皮對照藥材0.3 g,同供試液制備1.1項下的方法處理制成對照藥材溶液。另取橙皮苷對照品適量加甲醇制成飽和溶液,作為對照品溶液。
3  薄層板0.5%氫氧化鈉溶液制備的硅膠G薄層板
4  點樣:供試液點樣2μL4 μL,對照品點樣2 μL。
5  展開劑:(1)乙酸乙酯-甲醇-水(100:17:13)(2)甲苯-乙酸乙酯-甲酸-水(20:10:1:1)的上層溶液
6  展開方式:二次展開,先用展開劑(1)上行展開3 cm,取出晾干再以展開劑(2)上行展開8 cm取出晾干。
7  顯色; 噴以3%三氯化鋁乙醇溶液略加熱吹干,置紫外光燈(365 nm)下檢視。
8  色譜識別供試品色譜除觀察到橙皮苷熒光斑點外,供試品與對照藥材在相同的位置上顯相同顏色的熒光班點。在色譜的中部有明顯的3個蘭-蘭白色熒光主斑點,為主要鑒別特征。
1 艾得康牌立即俏膠囊
2 陳皮對照藥材
橙皮苷
 
  大黃
1  供試液制備
取研細的片劑或膠囊粉末0.1 g,加甲醇20mL浸漬1 h,濾過,取濾液5 mL蒸干,殘渣加水10 mL使溶解,再加鹽酸1mL置沸水浴上加熱回流30 min,立即冷卻,用乙醚振搖提取2次,每次20 mL,合并乙醚液,蒸干,殘渣加三氯甲烷1 mL使溶解作為供試品溶液。
2  對照液制備
取大黃對照藥材0.g,同供試液制備項下的方法處理制成對照藥材溶液。另取大黃酸對照品加甲醇制成每1 mL含1 mg的溶液作為對照品溶液。
3  薄層板0.3%羧甲基纖維素鈉為合劑的硅膠H薄層板或硅膠G薄層板
4  點樣:各點樣4 μL。
5  展開劑:石油醚(30~60℃)-甲酸乙酯-甲酸(15:5:1)的上層溶液
6  展開方式:上行展開8 cm。
7  顯色; 紫外光燈(365 nm)下檢視,再置氨蒸中熏數分鐘后,日光下檢視。
8  色譜識別紫外光燈(365 nm)下檢視,供試品色譜中在與對照藥材色譜相應的位置上顯相同的個橙黃色熒光主斑點在與對照品色譜相應的位置上顯相同的橙黃色熒光斑點。置氨蒸氣中熏后,日光下檢視斑點變為紅色。
 
1 金多靶減肥降脂素
2 大黃對照藥材
 
  甘草
1  供試液制備
1.1 固體試樣
1.1.1 片劑及不含油的膠囊  稱取研細的試樣g置于具塞錐瓶中,加乙醚40 mL置水浴上加熱回流1 h,濾過,棄去乙醚液,殘渣加甲醇30 mL加熱回流1 h,濾過,濾液蒸干,殘渣加水40 mL使溶解,用水飽和的正丁醇提取3次,每次20 mL合并正丁醇液,用水洗滌3次,棄去水液,正丁醇液置水浴上蒸干,殘渣加甲醇5 mL使溶解作為供試品溶液
1.1.2 含油膠囊  稱取試樣g置于折疊濾紙上,用石油醚分數次洗去油脂,再將濾紙上的試樣轉入具塞錐形瓶中,按1.1.1項下自“加乙醚40 mL”起依法操作。
1.1.3 糖塊  取適量試樣加水40 mL使溶解按1.1.1項下自“用水飽和的正丁醇提取3次”起依法操作。
1.1 液體試樣
取樣10 mL,加水稀釋至40 mL按1.1.1項下自“用水飽和的正丁醇提取3次”起依法操作。
2  對照液制備
取甘草對照藥材g,同供試液制備1.1.1項下的方法處理制成對照藥材溶液。另取甘草酸單銨鹽對照品加甲醇制成每1 mL含mg的溶液作為對照品溶液。
3  薄層板用1%氫氧化鈉溶液制備的硅膠G薄層板。
4  點樣:各1 μL2 μL。
5  展開劑:乙酸乙酯-甲醇-冰乙酸-水(15:1:1:2)
6  展開方式:展開箱用展開劑預平衡15 min,上行展開,展距8 cm。
7  顯色; 噴以硫酸乙醇(1→10),105 加熱至斑點顯色清晰,置紫外光燈(365 nm)下檢視。
8  色譜識別供試品色譜中在與對照藥材色譜相應的位置上顯相同顏色的熒光斑點在與對照品色譜相應的位置上顯相同的橙黃色熒光斑點。

1 鷹牌川貝枇把糖
2 甘草對照藥材
3 甘草酸
  人參、西洋參
 供試液制備
1.1 固體試樣
1.1.1片劑及不含油的膠囊  稱取研細的試樣g置于具塞錐瓶中加三氯甲烷40 mL,置水浴上加熱回流1 h,棄去三氯甲烷液,渣揮干溶劑,加水0.5 mL攪勻濕潤,加水飽和的正丁醇10 mL,超聲處理30 min,吸取上清液,加氨試液(400→1000)3倍量,搖勻,放置分層,取上層液蒸干,殘渣加甲醇1 mL使溶解,作為供試品溶液。
1.1.2含油膠囊  稱取試樣g置于折疊濾紙上,用石油醚分數次洗去油脂,再將濾紙上的試樣轉入具塞錐瓶中,自“加三氯甲烷40 mL”起依法操作。
1.2 液體試樣
取試樣10 mL,加水飽和的正丁醇20 mL,振搖提取,分取正丁醇層,加氨試液(400→1000)3倍量,搖勻,放置分層,取上層液蒸干,殘渣加甲醇1 mL使溶解,作為供試品溶液。
2  對照液制備
取人參或西洋參對照藥材約g,同供試液制備1.1.1項下的方法處理制成對照藥材溶液。另取人參皂苷Rb1、Re、Rg1、F11對照品,加甲醇制成每1 mL各含2 mg的混合溶液,作為對照品溶液。
3  薄層板硅膠G薄層板。
4  點樣:供試液2 μL10 μL,對照液2 μL。
 展開劑:三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-水(15:40:22:10)10 ℃以下放置的下層液
6  展開方式:展開槽內加入展開劑10 mL,槽內用硫酸控制相對濕度為42%(硫酸57 mL+水100 mL)。室溫25 ℃,平衡15 min后,上行展開12 cm14 cm,取出,晾干
7  顯色; 噴以硫酸乙醇溶液(1→10)在105 ℃加熱至斑點顯色清晰,分別置日光和紫外光燈(365 nm)下檢視。
8  色譜識別供試品的可見光色譜及熒光色譜與對照藥材色譜基本相符,其中西洋參含有的人參皂F11,人參不含,而人參含有的人參皂Rf ,西洋參不含,可作為人參與西洋參鑒別的依據。對照品斑點自下而上依次為Rb1ReRg1F11人參皂Rf位于人參皂苷Rg1、F11之間
 
1. 二參含片(含人參、西洋參)    1. 虎哥牌生力膠囊(含人參)
2. 人參對照藥材                  2. 人參對照藥材
 3. 西洋參對照藥材                3. 人參皂Rb1、Re、Rg1、F11
  銀杏葉
1   供試液制備
1.1 片劑及不含油的膠囊  稱取研細成粉末的試樣4 g置于250 mL具塞錐瓶中,加50 %的丙酮100 mL,加熱回流2.5 h,放冷濾過,濾液蒸去丙酮,放冷,殘液用乙酸乙酯振搖提取2次,每次50 mL,合并提取液,蒸干殘渣加15%乙醇2 mL使溶解,加于聚酰胺柱上(30~60目2.5 g,柱內徑1.5 cm,干法裝柱),用5%乙醇200 mL洗脫,收集洗脫液,濃縮至50 mL,放冷用乙酸乙酯提取2次,每次50 mL,合并提取液,蒸干,殘渣加丙酮5 mL使溶解,作為供試品溶液。
1.2 含油膠囊  稱取膠囊內容物4 g置于折疊濾紙上,用石油醚分數次洗去油脂,揮干溶劑,將濾紙上的試樣轉入250 mL具塞錐瓶中按1.1項下自“加50%的丙酮100 mL”起,依法操作。
1.3 沖劑  稱取研細成粉末的試樣4 g,加50%丙酮100 mL使溶解,用濾紙過濾,濾液蒸去丙酮,放冷,殘渣用乙酸乙酯提取2次,每次50 mL,合并提取液,蒸干,用丙酮5 mL溶解殘渣,作為供試品溶液。
2  對照液制備
取銀杏內酯A、B、C及白果內酯對照品加丙酮制成每1 mL含0.5 mg的混合溶液,作為對照品溶液。
3  薄層板用含4%醋酸鈉的羧甲基纖維素鈉溶液制備的硅膠H薄層板。
4  點樣:供試品溶液和對照品溶液各點樣5 μL,可增加供試品溶液的點樣量以確定試樣中是否含有銀杏。
 展開劑:甲苯-乙酸乙酯-丙酮-甲醇(10:5:5:0.6)
6  展開方式:在15 ℃以下展開,上行展開12 cm,取出晾干。
7  顯色; 用醋酐蒸氣熏15 min,在140 ℃~160 ℃加熱30 min,置紫外燈(365 nm)下檢視。
8  色譜識別供試品色譜中在與對照品色譜相應的位置上,顯相同顏色的熒光斑點。
 
1.試樣Gincosan
2.益智靈
3.GIMKGO POWER
4.銀杏內酯A、B、C、白果內酯
4. 銀杏內酯A、B、C、白果內酯
5. 西洋參銀杏葉茶
6. 日和素未檢出銀杏葉4μL
7. 日和素 8μL
8. 日和素 12μL
9. 銀杏內酯A、B、C、白果內酯
 
  葛根
1   供試液制備
1.1片劑或膠囊
1.1.1稱取研細的試樣2 g加甲醇30 mL,放置2 h,濾過,濾液蒸干,殘渣加甲醇1 mL使溶解,作為供試品溶液
1.1.2按1.1.1制備的供試品溶液如果含有較多雜質,影響薄層色譜分離,可改用下述方法制備供試品液稱取研細的試樣2 g,加乙醇40 mL加熱回流30 min,濾過,濾液蒸干,殘渣加0.3%氫氧化鈉溶液20 mL溶解并轉移至分液漏斗中,用稀鹽酸(234→1000)調節pH 5~6用乙酸乙酯振搖提取2次,每次20 mL,合并提取液,用無水硫酸鈉脫水,濾過濾液蒸干,殘渣加乙酸乙酯2 mL使溶解,作為供試品溶液。
1.2 液體試樣
混勻的試樣20 mL置分液漏斗中,用乙酸乙酯振搖提取兩次,每次20 mL,合并提取液,用無水硫酸鈉脫水,濾過濾液蒸干,殘渣加乙酸乙酯1 mL使溶解,作為供試品溶液
2  對照液制備
取葛根素對照品加甲醇制成每1 mL含mg的溶液,作為對照品溶液。
3  薄層板以0.5%羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板。
4  點樣:條帶狀點樣供試液5 μL~10 μL,對照液5 μL。如果試樣中葛根素含量較低可增加點樣量。
 展開劑:三氯甲烷-甲醇-水(28:7:1)
6  展開方式:上行展開12cm,取出,晾干。
7  顯色;置氨蒸氣中熏15 min,置紫外燈(365 nm)下檢視。
8  色譜識別供試品色譜中在與對照品色譜相應的位置上顯相同顏色的熒光條斑。
1. 喜悅血燕美肌較囊
2. 葛根素
  蘆薈
1   供試液制備
固體試樣或膠囊  取本品粉末2 g,加甲醇30 mL水浴上加熱至沸,振搖數分鐘,濾過,濾液作為供試品溶液
2  對照液制備
取蘆薈苷對照品加甲醇制成每1 mL含mg的溶液,作為對照品溶液。
3  薄層板硅膠G薄層板
4  點樣:供試品溶液與對照品溶液分別點樣1 μL~2 μL。
5  展開劑:乙酸乙酯-甲醇-水(100∶17∶13)。
6  展開方式:上行展開1cm。
7  顯色; 噴以10%氫氧化鉀甲醇溶液,置紫外燈365 nm下檢視。
8  色譜識別供試品色譜中,在與對照品色譜相應的位置上顯相同顏色的熒光斑點。
1. 金正方蘆薈健康1號膠囊                1. 蘆薈
        2. 蘆薈                                2. 十八寶牌愛索菲膠囊

、保健食品中槲皮素山柰素異鼠李素的含量測定
Determination of quercetinkeampferolisorhamnetin in health food
 
1  范圍
本方法規定了保健食品中槲皮素、山柰素、異鼠李素的液相色譜測定方法。
本方法適用于以銀杏葉或銀杏葉提取物為主要原料的保健品食品中槲皮素、山柰素、異鼠李素的測定。
2  原理
試樣經提取、水解等前處理后,采用液相色譜分離、紫外檢測器檢測,以保留時間定性,以外標法定量。
3  試劑和材料
注:除非另有說明,本方法所用試劑均為分析純,水為 GB/T6682 規定的一級水。
3.1  試劑
3.1.1  甲醇(CH3OH):色譜純
3.1.2  磷酸(H3PO4)。
3.1.3  鹽酸(HCl):質量分數約37 %。
3.2  試劑配制
3.2.1  鹽酸溶液(1.5 mol/L):取鹽酸13.5 mL,加水適量使成100 mL,搖勻
3.2.2  80%甲醇溶液:將甲醇和水按80+20的體積比混合均勻
3.3  標準品
3.3.1 槲皮素(C15H10O7):CAS編號117-39-5,純度≥98%
3.3.2 山柰素(C15H10O6):CAS編號520-18-3,純度≥98%
3.3.3  異鼠李素(C16H12O7):CAS編號480-19-3,純度98%
3.3 標準溶液的配制
3.4.1  標準儲備液(1 mg/mL):分別準確稱取槲皮素山柰素異鼠李素標準品100 mg(準確至0.1 mg),于100 mL容量瓶中,用甲醇溶解并定容至刻度
3.4.2  槲皮素山柰素異鼠李素混合標準中間液(200 μg/mL):分別準確吸取槲皮素山柰素異鼠李素標準儲備液各5.0mL于25 mL容量瓶中,用流動相定容
3.4.3  混合標準系列工作液:分別準確吸取槲皮素山柰素異鼠李素混合標準中間液0.50 mL、1.0mL、2.0mL、3.0mL和5.0mL于10 mL容量瓶中,用流動相定容至刻度,配制成質量濃度分別為10 μg/mL、20 μg/mL、40 μg/mL、60 μg/mL、100 μg/mL 的混合標準系列工作液。
4  儀器設備
4.1  高效液相色譜儀:附二極管陣列或紫外檢測器(UV)。
4.2  分析天平感量為 1 mg 和 0.1 mg。
4.3  超聲波清洗器:功率250W
4.4  水浴鍋
5  分析步驟
5.1 試樣制備
5.1.1 槲皮素山柰素異鼠李素的測定
取試樣適量(相當于含槲皮素、山柰素、異鼠李素總量約3 mg,精確至0.001 g),加20 mL甲醇超聲提取30 min,濾過,殘渣用甲醇約5 mL洗滌,洗液并入濾液,加入20 mL鹽酸溶液(1.5 mol/L),水浴回流水解3 h,冷卻,轉移至50 mL容量瓶中,用甲醇定容至刻度,混勻,經0.45 μm微孔濾膜過濾,取續濾液作為試樣待測液
5.1.2 游離槲皮素山柰素異鼠李素的測定
取試樣適量(相當于含槲皮素、山柰素、異鼠李素總量約3 mg,精確至0.001 g),置具塞錐形瓶中精密加入80%甲醇溶液20 mL,密塞,稱定重量,超聲提取(功率250W,頻率33kHz)20 min,取出,放冷,再稱定重量,用80%甲醇溶液補足減失的重量,搖勻,濾過,取續濾液,作為試樣待測液
5.2色譜參考條件
5.2.1  色譜柱: C18 柱,5 μm,100 Å,3.9 mm ID×150 mm或同等性能色譜柱。
5.2.2  柱溫:室溫。
5.2.3  檢測波長:360 nm。
5.2.4  流動相甲醇+0.4%磷酸溶液=50+50
5.2.5  流速:1.0 mL/min。
5.2.6  進樣量:10 μL。
5.3 標準曲線的制作
將10 μL的混合標準系列工作液分別注入液相色譜儀中,測得相應的峰面積,以標準工作液的濃度(μg/mL)為橫坐標,以峰面積為縱坐標,繪制標準曲線。
5.4 試驗溶液的測定
將10 μL 試樣待測液(5.1.1)注入液相色譜儀中,以保留時間定性,測得峰面積,根據標準曲線得到待測液中槲皮素山柰素異鼠李素的濃度(μg/mL)將10 μL 試樣待測液(5.1.2)注入液相色譜儀中,以保留時間定性,測得峰面積,根據標準曲線得到待測液中游離槲皮素山柰素異鼠李素的濃度(μg/mL)。
6  分析結果的表述
6.1  試樣中槲皮素山柰素異鼠李素的含量分別按式(1)計算
    ………………(1)
式中
Xi——試樣中槲皮素或山柰素或異鼠李素的含量,單位為克每百克(g/100g) 
Ci——被測定樣液槲皮素或山柰素或異鼠李素的濃度,單位為克每毫升(μg/mL) 
V——被測定樣液的最終定容體積,單位為毫升( mL)
m——試樣的稱樣質量,單位為克( g)
100——單位轉換
1000——單位轉換。
6.2  試樣中槲皮素山柰素異鼠李素的總含量按式(2)計算
    ………………(2)
式中
X——試樣中槲皮素山柰素異鼠李素的總含量,單位為克每百克(g/100g) 
X1——試樣中槲皮素的含量,單位為克每百克(g/100g) 
X2——試樣中山柰素的含量,單位為克每百克(g/100g)
X3——試樣中異鼠李素的含量,單位為克每百克(g/100g)
6.3  試樣中銀杏葉總黃酮苷的含量按式(3)計算
    ………………(3)
式中
Y——試樣中銀杏葉總黃酮含量,單位為克每百克(g/100g) 
X——試樣中槲皮素山柰素異鼠李素的總含量,單位為克每百克(g/100g) 
2.51——換算因子
6.4  試樣中游離槲皮素山柰素異鼠李素的含量分別按式(4)計算
    ………………(4)
式中
Xi——試樣中游離槲皮素或游離山柰素或游離異鼠李素的含量,單位為毫克每克(mg/g) 
Ci——被測定樣液游離槲皮素或游離山柰素或游離異鼠李素的濃度,單位為克每毫升(μg/mL) 
V——被測定樣液的最終定容體積,單位為毫升( mL)
m——試樣的稱樣質量,單位為克( g)
1000——單位轉換。
計算結果以重復條件下獲得的兩次獨立測定結果的算術平均值表示,保留三位有效數字。
7  精密度
在重復性條件下獲得的兩次獨立測定結果的絕對差值不超過算術平均值的 10% 。
8 其他
當稱樣量為 0.5 g,定容體積為 50 mL時,本方法檢測限分別為槲皮素0.02 mg/g山柰素0.03 mg/g異鼠李素0.05 mg/g。

附錄A 
標準溶液和試樣溶液典型液相色譜圖
 
A.1槲皮素山柰素異鼠李素標準溶液色譜圖,見圖A.1。
 
圖A.1  槲皮素、山柰素、異鼠李素標準溶液色譜圖
 
A.2含槲皮素山柰素異鼠李素的試樣溶液色譜圖,見圖A.2。
 
圖A.2  含槲皮素、山柰素、異鼠李素的試樣溶液色譜圖
 
 
 
 

十二、保健食品中茶氨酸的測定
Determination of theanine in health food
                                                                                   
 
1 范圍
本方法規定了保健食品中茶氨酸的高效液相色譜測定方法。
本方法適用于紅茶、綠茶等為主要原料的保健食品中茶氨酸含量的測定。
 
2 方法原理
.   將試樣中的茶氨酸用水提取,使用等度洗脫高效液相色譜分離,紫外檢測器檢測,峰面積或峰高定量,外標法計算結果。
 
3 試劑
注:除特殊說明,所用試劑均為分析純,實驗用水符合GB/T 6682規定一級水要求。
3.1  三氟乙酸(CF3COOH):色譜純。
3.2  茶氨酸標準品(C7H14N2O3):CAS號3081-61-6,純度≥98%
3.3  三氟乙酸水溶液(pH 3.0):取水加三氟乙酸(3.1),調至pH 3.0。
3.4  茶氨酸標準儲備(3.5 mg/mL:稱取35.mg茶氨酸標準品(精確到0.1 mg)用水溶解后,移入10 mL容量瓶,用水定容至刻度
3.5  茶氨酸標準使用液:分別準確吸取茶氨酸標準儲備液(3.4)0.2 mL、0.4 mL、0.6 mL、0.8 mL、1.0 mL移入10 mL容量瓶,用水定容至刻度得到濃度分別為0.07 mg/mL、0.14 mg/mL、0.21 mg/mL、0.28 mg/mL、0.35 mg/mL茶氨酸標準使用
 
4 儀器設備
4.1  高效液相色譜儀:配有紫外檢測器或二極管陣列檢測器
4.2  恒溫水浴鍋
4.3  離心機,4000 r/min。
4.4  分析天平:感量1 mg,0.1 mg
4.5  pH計。
 
5 分析步驟
5.1  固體試樣的處理:稱取粉碎試樣適量(精確至0.001 g相當于含茶氨酸10 mg),加30 mL,在80 恒溫水浴鍋上加熱40 min,冷卻,離心,過濾后,轉移至50 mL容量瓶,用水定容至刻度,混勻。試樣溶液過0.45 μm水膜,待測
5.2  液體試樣的處理:取一定量的試樣在水浴鍋上蒸干,殘渣水溶解,轉移至10 mL容量瓶,用水定容至刻度,混勻。溶液過0.45 μm水膜,待測
5.3  色譜參考條件
5.3.1  色譜柱:C18,5 μm,4.6×250 mm或同
5.3.2  檢測波長:203 nm
5.3.3  流動相:三氟乙酸水溶液(3.3)。
5.3.4  流速:1.0 mL/min
5.3.5  進樣量10.0 mL。
5.3.6  柱溫:35 
5.4  色譜分析
5.4.1  標準曲線的制備:分別取標準使用(3.5)濃度分別為0.07 mg/mL、0.14 mg/mL、0.21 mg/mL、0.28 mg/mL、0.35 mg/mL各10 μL進行HPLC分析,以標樣濃度對峰面積繪制茶氨酸的標準回歸曲線。
5.4.2  試樣測定:將試樣溶液注入高效液相色譜,以保留時間和紫外-可見吸收光譜定性,峰面積定量,由色譜峰的峰面積可從標準曲線上求出相應的茶氨酸的濃度
 
6結果計算
 
6.1試樣中茶氨酸的含量
 
X=  
 
式中:
X—試樣溶液中茶氨酸的含量,g/100g
C—試樣溶液中茶氨酸的濃度,mg/mL;
V—試樣定容體積,mL
m—試樣質量,g。
6.2結果表示:計算結果保留三位有效數字
計算結果以重復條件下獲得的兩次獨立測定結果的算術平均值表示,計算結果保留三位有效數字。 
7  精密度
在重復性條件下獲得的兩次獨立測定結果的絕對差值不超過算術平均值的 10% 
8 其他
本方法的最低檢出量:10 ng。

附 錄 A
(資料性附錄)
茶氨酸標準樣品液相色譜圖
 
0.28 mg/mL茶氨酸標準溶液液相色譜圖見圖A.1。
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
                   圖A.1  0.28 mg/mL茶氨酸標準溶液液相色譜圖
 

十三、保健食品中五味子醇甲、五味子甲素和乙素的測定
Determination of schisandrindeoxyschisandrin、schisandrin B in health food
                                                                                   
 
1 范圍
本方法適用于以五味子為主要原料生產的保健食品中五味子醇甲、五味子甲素和乙素含量的高效液相色譜測定。
 
2 原理
將試樣中的木脂素提取后,使用等度洗脫反相高效液相色譜進行分離,二極管陣列檢測器檢測,根據色譜峰的保留時間和紫外光譜圖定性,外標法定量。適用于以北五味子為主要原料生產的保健食品中五味子醇甲、五味子甲素和乙素定量分析。
3 試劑
注:除特殊說明,所用試劑均為分析純,實驗用水符合GB/T 6682-2008一級水要求。
3.1  甲醇CH3OH:色譜純
3.2  五味子醇甲、五味子甲素和乙素標準品:含量均大于98%
3.3  五味子醇甲、五味子甲素和乙素標準溶液的配制:配制五味子醇甲、五味子甲素和乙素標準儲備液,濃度分別為2mg/mL,再以此儲備液配制成混合標準系列溶液,濃度范圍為0.02mg/mL~1mg/mL;所有標準溶液均用甲醇配制。
4 儀器
4.1  高效液相色譜儀:二極管陣列檢測器或紫外檢測器。
4.2  超聲波清洗器
4.3  分析天平:感量1mg,0.1mg
5 分析步驟
5.1  試樣處理:稱取粉碎后樣品適量(相當于含五味子總量30mg,精確至0.001g),置20mL容量瓶中,加入甲醇約18mL,超聲提取20min,取出,靜置待冷,加甲醇至刻度。試樣溶液過0.45μm有機系濾膜,濾液進行色譜分析。
5.2  測定
5.2.1  液相色譜參考條件
5.2.1.1  色譜柱:C18柱,5μm,100Å,4.6×250mm或同等性能色譜柱
5.2.1.2  檢測波長:254nm
5.2.1.3  等度淋洗條件:甲醇-水=77:23(v/v)
5.2.1.4  流速:1mL/min
5.2.1.5  柱溫:35
5.2.2  色譜分析
5.2.2.1  標準曲線的制備:將標準混合系列溶液均取10μL 進HPLC 分析,用峰面積對濃度計算五味子醇甲、五味子甲素和乙素的標準回歸曲線。
5.3.2.2  試樣測定:取10μL 試樣凈化液進行高效液相色譜分析,以絕對保留時間和紫外光譜圖定性,用峰面積通過五味子醇甲、五味子甲素和乙素的標準曲線定量計算試樣中的含量。
6分析結果的表述
試樣中五味子醇甲、五味子甲素和乙素的含量按式(1)計算:
 
           
 ………………(1)
                      
式中:X——試樣中五味子醇甲、五味子甲素和乙素的含量,mg/100g
                C —— 試樣溶液中五味子醇甲、五味子甲素和乙素的含量,mg/mL;
                m —— 試樣質量,g。
計算結果以重復條件下獲得的兩次獨立測定結果的算術平均值表示,保留位有效數字。
7 精密度
在重復性條件下獲得的兩次獨立測定結果的絕對差值不超過算術平均值的 10% 
8 其他
本方法的檢測限分別為五味子醇甲0.02μg,五味子甲素 0.03μg,五味子乙素0.02μg。
本方法的最佳線性范圍為0.2-10μg。

十四、保健食品中腺苷的測定
Determination of adenosine in health food
 
1  范圍
本方法規定了保健食品中腺苷的高效液相色譜測定方法。
本方法適用于保健食品中腺苷的測定。
2  原理
試樣經水超聲提取,用高效液相色譜進行測定,以保留時間定性,峰面積外標法定量
3  試劑和材料
注:除非另有說明,本方法所用試劑均為分析純,水為 GB/T6682 規定的一級水。
3.1   試劑
3.1.1 磷酸二氫鉀(KH2PO4)。
3.1.2 甲醇(CH3OH)色譜純。
3.1.硅藻土(SiO2)化學純。
3.2   試劑配制
0.01mol/L磷酸二氫鉀溶液:稱取1.36 g磷酸二氫鉀,加水溶解并稀釋至1000 mL。經0.45 μm微孔濾膜過濾后使用。
3.3   標準品
腺苷(C10H13N5O4):純度≥98%,或經國家認證并授予標準物質證書的標準物質。
3.4   標準溶液配制
3.4.1 腺苷標準儲備液(1.0 mg/mL):精密稱取10 mg (精確到0.1 mg)腺苷標準品于10 mL 容量瓶中,用水溶解并定容至刻度,搖勻。
3.4.2 腺苷標準中間液(100 μg/mL):精密吸取腺苷標準儲備液2.5 mL于25 mL容量瓶中,用水稀釋至刻度,搖勻。
3.4.3 腺苷標準工作液:精密吸取腺苷標準中間液0.1 mL、0.2 mL、0.5 mL、1.0 mL、2.0 mL、5.0 mL于10 mL容量瓶中,用水稀釋至刻度,得濃度為1.0 μg/mL、2.0 μg/mL、5.0 μg/mL、10.0 μg/mL、20.0 μg/mL、50.0 μg/mL的標準工作液。
4  儀器設備
4.1 分析天平:感量0.1 mg,0.01 mg。
4.2 超聲波提取
4.3 離心機。
4.4 高效液相色譜儀:配有紫外(UV)檢測器或二極管陣列(DAD)檢測器。
5  分析步驟
5.1  試樣制備
5.1.1   試樣處理
5.1.1.1  固體試樣
稱取粉碎并混合均勻的試樣0.5 g~2 g (精確到0.001 g) (含待測組分約0.05 mg ~2.5 mg)于50 mL容量瓶中,加入水約30 mL,超聲提取20 min,放冷,用水稀釋至刻度,搖勻,以3000 rpm/min離心5 min。經0.45μm水系濾膜過濾后,取續濾液供液相色譜分析用。
5.1.1.2  軟膠囊試樣
取試樣剪開,擠出內容物并混勻,稱取0.5 g~2 g (精確到 0.001 g),加入等量硅藻土,研至分散均勻,稱取其中部分 (精確到0.001g,含待測組分約0.05 mg ~2.5 mg),轉移至250 mL具塞三角瓶中,并吸取50 mL水,并入三角瓶中,稱重,加塞超聲提取20 min,放冷,用水補足重量,搖勻,靜置澄清或以3000r/min離心min。取上清液經0.45 μm水系濾膜過濾后,續濾液供液相色譜分析用。
5.1.1.3  液體試樣
精密量取混勻的試樣5.0 mL ~10.0 mL (含待測組分約0.05 mg ~2.5 mg)于50 mL容量瓶中,加入水約30 mL,超聲提取20 min,放冷,用水稀釋至刻度,搖勻,以3000r/min離心5min。經0.45μm水系濾膜過濾后,取續濾液供液相色譜分析用。
5.1.2  稀釋
根據試樣中腺苷的含量用水進行適當的稀釋(F),使待測溶液中腺苷濃度在1.0 μg/mL~50.0 μg/mL范圍內。
5.2  液相色譜參考條件
5.2.1 色譜柱:C18柱4.6×250 mm,5 μm或同等性能色譜柱。
5.2.2 柱溫:室溫。
5.2.3 檢測波長:254 nm。
5.2.4 流動相:甲醇+0.01mol/L磷酸二氫鉀溶液=10+90。
5.2.5 流速:1.0 mL/min。
5.2.6 進樣量:10 μL。 
5.3  標準曲線的制作
腺苷標準工作液(3.4.3)從低濃度到高濃度分別注入高效液相色譜儀中,測定相應的峰面積。以標準工作液的濃度為橫坐標,以峰面積為縱坐標,繪制標準曲線(標準溶液液相色譜圖見附錄A中圖A.1)
5.4  試樣溶液的測定
在相同色譜條件下,將待測溶液(5.1.1.1、5.1.1.2、5.1.1.3、5.1.2)注入高效液相色譜儀中,以保留時間定性,測得峰面積,根據標準曲線計算待測溶液中腺苷的濃度(待測溶液液相色譜圖見附錄A中圖A.2)
6  分析結果的表述
試樣中腺苷含量按式(1)計算:
    ...................................(1)
式中:
X——試樣中腺苷的含量,固態試樣單位為毫克每百克(mg/100g),液態試樣單位為毫克每百毫升(mg/100 mL);
ρ——根據標準曲線計算得到的待測溶液中腺苷的濃度,單位為微克每毫升(μg/mL) 
V——試樣稀釋或定容體積,單位為毫升(mL)
F——稀釋倍數
m——試樣取樣質量,單位為克(g);試樣取樣體積,單位為毫升(mL);
100——單位轉換
1000——單位轉換
計算結果以重復條件下獲得的兩次測定結果的算術平均值表示,保留三位有效數字。
7  精密度
在重復性條件下獲得的兩次獨立測定結果的絕對差值不超過算術平均值的10%。
8  其他 
當稱樣量為2.0g時,定容體積為50 mL時,腺苷的定量限為1.5mg/100g。
當取樣量為10 mL時,定容體積為50 mL時,腺苷的定量限為0.30mg/100mL。

附錄 A
標準溶液和待測溶液典型高效液相色譜圖
A.1 腺苷標準溶液色譜圖,見圖A.1。
 
圖A.1 腺苷標準溶液色譜圖
 
A.2 含有腺苷的待測溶液色譜圖,見圖A.2。
 
圖A.2 含有腺苷的待測溶液色譜圖
 
 
 

十五、保健食品中總皂苷的測定
Determination of total ginsenosides in health food
 
1  范圍
本標準規定了保健食品中總皂苷的分光光度測定方法。
標準適用于保健食品中總皂苷含量的測定。
2  原理
試樣用水提取總皂苷類成分,經大孔樹脂柱或水飽和正丁醇萃取除雜后,試樣中的皂苷類成分在高氯酸的作用下與香草醛反應,產生特征的紫紅色,采用分光光度法測定560 nm波長處的吸光度,進行定量。
3  試劑和材料
注:除非另有說明,本方法所用試劑均為分析純,水為 GB/T 6682 規定的一級水。
3.4 試劑
3.1.1  Amberlite-XAD-2 大孔樹脂(或D-101大孔樹脂)。
3.1.2  中性氧化鋁:層析用(100-200目)。
3.1.3  正丁醇(CH3(CH2)2CH2OH)。
3.1.4  無水乙醇(CH3CH2OH)。
3.1.5  甲醇(CH3OH)。
3.1.6  氨水(NH3)。
3.1.7  高氯酸(HClO4)。
3.1.8  冰乙酸 (CH3COOH)。
3.1.9  香草醛(C8H8O3)。
3.2 試劑配制
3.2.1  香草醛溶液(5%):稱取5g香草醛,加冰乙酸溶解并定容至100mL,混勻
3.2.2  水飽和正丁醇溶液取正丁醇適量,加入適量水,充分振搖,靜置使分層,上層液體即為水飽和正丁醇。
3.2.3  氨試液:取氨水40mL,加水使成100mL,混勻。
3.3 標準品
人參皂苷Re (C48H82O18)。
3.4 標準溶液的配制
人參皂苷Re標準儲備液(0.2 mg/mL):準確稱取10.0 mg 人參皂苷Re標準品(精確至0.1 mg)于 50 mL容量瓶中,用甲醇溶解并定容至刻度,搖勻。
4  儀器設備
4.1  紫外/可見分光光度計。
4.2  天平感量為 1 mg 和 0.1 mg。
4.3  超聲波清洗器。
4.4  離心機轉速 ≥4000 r/min。  
4.5  恒溫水浴鍋。
5  分析步驟
5.1 試樣制備
5.1.1 試樣處理
5.1.1.1 固體試樣
稱取已粉碎混合均勻的待測試樣1 g(精確 0.001 g)(或根據試樣含總皂苷量定),置于具塞錐形瓶中,加入水100.0 mL稱重,超聲30 min,放冷,再用水補足減失重量,搖勻,放置,濾過,續濾液備用
5.1.1.2液體試樣 
含乙醇的液體試樣,吸取混合均勻的待測試樣10.0 mL(或根據試樣含總皂苷量定)置水浴上揮盡乙醇后,用水轉移至10mL容量瓶中,并用水稀釋至刻度,備用;非乙醇類的液體試樣,直接取樣
5.1.2 去除雜質(可根據樣品性質選擇以下一種方法)
5.1.2.1 大孔樹脂柱層析法 
用10 mL注射器作層析管,內裝3cm大孔樹脂,上加1 cm中性氧化鋁。先用25 mL70%乙醇洗柱,棄去洗脫液,再用約25 mL水洗脫至無醇味,棄去洗脫液,加入1.0 mL已處理好的試樣溶液(5.1.1.1,5.1.1.2),用25 mL水洗柱,棄去洗脫液,再用25 mL或以上70%乙醇洗脫人參皂苷至洗脫液無色,收集洗脫液于蒸發皿中,置于60℃水浴揮干,殘渣用少量甲醇溶解并轉移至10mL具塞比色管中,備用。
5.1.2.2 水飽和正丁醇萃取法
取5.1.1.1項下備用溶液25.0 mL置分液漏斗中;或將5.1.1.2項下備用溶液用水全部轉移至分液漏斗中(非乙醇類液體試樣直接取10.0 mL)并加水至約25mL。加入20 mL水飽和正丁醇(3.2.2)振搖萃取,分取正丁醇液(必要時可離心),重復操作3次,合并正丁醇液用20 mL氨試液(3.2.3)洗滌,重復操作2次棄去氨試液,正丁醇液水浴蒸干,殘渣用甲醇溶解并轉移至25 mL量瓶中(液體樣品則轉移至10 mL量瓶中),加甲醇定容至刻度,搖勻,濾過,取續濾液,備用
5.2 標準曲線的制作
吸取人參皂苷Re標準溶液(3.40 mL、0.4 mL、0.6 mL、0.8 mL、1.0 mL、1.2 mL于10 mL具塞比色管中,置水浴中揮干溶劑,加入0.2 mL香草醛冰乙酸溶液(3.2.1),再加入0.8 mL高氯酸(3.1.7),混勻,使殘渣全部溶解,置60℃水浴中加熱10 min,取出,冰浴冷卻后,加入5.0 mL冰乙酸(3.1.8),搖勻后,立即于560 nm波長處測定吸光度。
5.3 試溶液的測定
取5.1.2.1項下備用溶液,或者吸取5.1.2.2 項下備用溶液1.0 mL于10 mL具塞比色管中,從5.2 “置水浴中揮干溶劑……”起,與標準溶液同法測定吸光度。
5.4 結果校正(如樣品不存在背景干擾,無需校正)照5.1.2.1同法制備備用溶液,或者吸取5.1.2.2 項下備用溶液1.0 mL于10 mL具塞比色管中,置水浴中揮干溶劑,加入0.2 mL冰乙酸(3.1.8),從5.2 再精密加入0.8 mL高氯酸(3.1.7)……起,與試樣同法測定吸光度,做試樣背景校正。
6  分析結果的表述
試樣中總皂苷含量(以人參皂苷Re計)按式(1)計算:
 
      Ci ×V×100
X                       ..........................................(1)
        V0×m          
式中:
Xi——試樣中總皂苷的含量(以人參皂苷Re計),單位為克每百克(mg/100g)或毫克每百毫升(mg/100mL); 
Ci——經試樣背景校正后,由標準曲線算得被測液中人參皂苷Re質量,單位為毫克( mg) 
V——被測定樣液的定容體積,單位為毫升( mL)
V0——被測定樣液的顯色體積,單位為毫升( mL)
m——試樣的稱樣質量,單位為克( g)
100——單位轉換。
計算結果以重復條件下獲得的兩次獨立測定結果的算術平均值表示,保留位有效數字。
7  精密度
在重復性條件下獲得的兩次獨立測定結果的絕對差值不超過算術平均值10% 。
8 其他
固體試樣:當稱樣量為 1.0 g,定容體積為 100 mL時,總皂苷(以人參皂苷Re計)的定量限為0.5 mg/100g,液體試樣:取樣量為1.0(或10.0)mL,定容體積為1(或10)mL時,總皂苷(以人參皂苷Re計)的定量限為0.005 mg/100mL
 
 
 
 
 

十六、保健食品中總黃酮的測定
Determination of total flavonoid in health food
                                                                                
 
范圍
本方法適用于以含黃酮類成分為主要原料的保健食品中總黃酮含量的測定。
 
原理
試樣經預處理除雜后,以甲醇或60%乙醇溶液提取黃酮類成分。試樣中的黃酮類成分可被亞硝酸鈉還原,與硝酸鋁生成絡合物,在氫氧化鈉溶液堿性條件下開環,生成 2-羥基查耳酮而使溶液顯特征的橙紅色,采用分光光法在510nm波長處測定吸光度,以蘆丁為對照品,采用標準曲線法計算樣品中總黃酮的含量。
 
3  試劑
注:除非另有說明,本方法所用試劑均為分析純,水為 GB/T 6682 規定的一級水。
3.1  5%亞硝酸鈉溶液:稱取5g亞硝酸鈉(NaNO),加水溶解成100mL
3.2  10%硝酸鋁溶液:稱取硝酸鋁(Al(NO3)3•9H2O)10g,加水溶解成100mL。
3.3  氫氧化鈉試液:取氫氧化鈉(NaOH)4.3g,加水溶解成100mL。
3.4  石油醚(60~90℃)。
3.5  乙醇(CH3CH2OH)。
3.6  甲醇(CH3OH)。
3.7  蘆丁對照品溶液: 取蘆丁對照品適量,精密稱定,加甲醇溶解,制成濃度為0.2mg/mL的對照品溶液。
 
4 儀器
4.1 紫外/可見分光光度計
4.2 超聲波提取器
4.3 離心機
4.4 分析天平:感量1mg,0.1mg
 
5 分析步驟
5.1  試樣處理(試樣取樣量、供試液取樣體積可根據試樣中總黃酮的含量適當調整,以保證測定的吸收度值在0.3~0.7范圍內)
5.1.1 固體與軟膠囊試樣:精密稱取固體試樣粉末或軟膠囊內容物0.4g(M),置索氏提取器中,加石油醚(60~90)加熱回流提取至提取液無色,棄去石油醚液,樣渣揮去石油醚,轉移至具塞錐形瓶中,精密加甲醇25mL(V1),密塞,稱定重量,超聲處理30分鐘,放冷至室溫,稱定重量,用甲醇補足減失的重量,搖勻,離心,取上清液作為供試品溶液。
5.1.2 液體試樣:精密吸取供試品2mL(M),至25mL(V1)量瓶中,加60%乙醇溶解并稀釋至刻度,搖勻,作為供試品溶液。
5.2 蘆丁對照品標準曲線制備:精密吸取蘆丁對照品溶液(3.7項)0.0,1.0,2.0,3.0,4.0,5.0,6.0mL,分別置25mL(V3)量瓶中,加水至6mL,加入5%亞硝酸鈉溶液1mL,搖勻,放置6min,加10%硝酸鋁溶液1mL,搖勻放置6min,加氫氧化鈉試液10mL,搖勻,再加水至刻度,搖勻,放置15分鐘,以0.0mL對照品溶液制得的溶劑為空白,在波長510nm處分別測定吸度值。以吸光度為縱坐標(A),對照品濃度為橫坐標(mg/mL),繪制標準曲線。
5.3  樣品測定:精密吸取供試溶液2mL(V2),至25mL量瓶中5.2,自加水至6mL起,……,至在510nm波長處測定吸光度,同法操作。從標準曲線上讀出供試品溶液中含總黃酮的濃度(C),計算樣品中總黃酮的含量(X)。
 
分析結果的表述
C×V1×V3×100
X = ————————
V2×M×1000
式中:
X—試樣中總黃酮百分含量,以蘆丁(C27H30O16)計, g/100g(mL);
C—標準曲線上讀出供試品溶液中總黃酮的濃度,mg/mL;
V1—試樣定容體積,mL;
V2—吸取供試液體積,mL;
V3—顯色定容體積,mL;
M—試樣取樣量,g(mL)。
計算結果以重復條件下獲得的兩次獨立測定結果的算術平均值表示,保留位有效數字。
 
精密度
同一操作者兩次平行測試結果的絕對差值不得超過算數平均值的: 15%固體樣品)、10%(液體樣品
注:樣品有顏色時,可采用樣品標準添加法,以0號管調零,繪制標準曲線,以消除樣品顏色干擾。
 
8 其他
本方法的檢測限(LOD)為50ng;定量限(LOQ)200ng
本方法的最佳線性范圍(以蘆丁計):9.9~59.2最佳線性范圍

十七、保健食品殼聚糖脫乙酰度的測定
Determination of deacetylationg degree of chitosan in health food
 
1  范圍
本方法規定了保健食品中殼聚糖脫乙酰度電位滴定測定方法。
2  原理
用過量的鹽酸溶液溶解脫乙酰甲殼素試樣,鹽酸與脫乙酰甲殼素中的氨基等摩爾結合后,溶液中含有過量的鹽酸。用氫氧化鈉溶液滴定時,氫氧化鈉首先中和過量的鹽酸,溶液pH 發生變化,即第一個“突躍”,然后氫氧化鈉再中和與脫乙酰甲殼素中氨基結合的鹽酸,達到滴定等電點時,溶液pH 出現第二個“突躍”,由兩個“突躍”之間消耗的氫氧化鈉量計算出試樣中的氨基含量,從而得到試樣的脫乙酰基度。
3  試劑和材料
3.1 鹽酸標準滴定液:c(HCl)=0.1 mol/L。
3.2氫氧化鈉標準滴定溶液:c(NaOH)=0.1 mol/L。
4  儀器設備
4.1  電磁攪拌器。 
4.2  酸度計或電位滴定儀。 
4.3 天平:感量1mg
4.4 電熱干燥箱。
5  分析步驟
5.1 試樣處理
稱取于105°C ± 2°C烘干至恒重的試樣0.2 g,精確至0.0001 g,加入30 mL 鹽酸標準滴定溶液,攪拌至完全溶解,再加50 mL 水,混勻。
5.2 滴定
用氫氧化鈉標準滴定溶液滴定5.1得到的溶液,測其pH,每滴加0.5 mL 記錄一次。當滴加至pH接近“突躍”時,逐滴滴定,記錄氫氧化鈉標準滴定溶液的體積和相應的pH,得到pH-氫氧化鈉標準滴定溶液體積曲線,找出其“突躍”點。記錄兩次突躍點間所消耗的氫氧化鈉標準滴定溶液的體積數值。
6  分析結果的表述
脫乙酰度的質量分數w按公式 ( 1 ) 計算
……………………………(1)
式中
ΔV——二個“突躍”點之間消耗的氫氧化鈉標準滴定溶液的體積,單位為毫升( mL );
c ——氫氧化鈉標準滴定溶液的濃度,單位為摩爾每升( mol/L );
10-3——單位換算系數;
16——氨基的摩爾質量,單位為克每摩爾( g/moL );
m ——試樣中殼聚糖的質量,單位為克( g );
0.0994——理論氨基含量( 16/161 )。
實驗結果以平行測定結果的算術平均值為準。在重復性條件下獲得的兩次獨立測定結果的絕對差值不大于算術平均值的2%。
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 

十八、蚓激酶活性的測定方法
Determination of activity of lumbrokinase
                                                                                 
1  范圍
本標準規定了蚓激酶粉中蚓激酶活性的測定方法。
2  原理
由于蚓激酶粉具有直接和間接溶解血纖維蛋白的作用,本方法采用瓊脂糖纖維蛋白平板法,通過蚓激酶標準品得到線性方程,將樣品帶入線性方程計算其中蚓激酶的效價。
3  試劑和材料
注:除非另有說明,本方法所用試劑均為分析純,水為 GB/T6682 規定的一級水。
3.1 試劑
3.1.1 磷酸氫二鈉(Na2HPO4·12H2O)。
3.1.2 磷酸二氫鈉(NaH2PO4·2H2O)。
3.1.3 氯化鈉(NaCl)。
3.1.3 鹽酸(HCl)。
3.1.4 纖維蛋白原。
3.1.5 凝血酶。
3.1.6 蚓激酶對照品。
3.1.7 瓊脂糖。
3.2 試劑配制
3.2.1 0.01 mol/L磷酸鹽緩沖液:取磷酸氫二鈉3.58 g,加水使溶解并稀釋至100 mL為A液;取磷酸二氫鈉0.78 g,加水使溶解并稀釋至500 mL為B液;將A、B兩液混合至pH7.8
3.2.2 工作溶液:取0.01 mol/L磷酸鹽緩沖液(pH7.8)與0.9%氯化鈉溶液(1:17)混合。
3.2.3 1.5%瓊脂糖液:取瓊脂糖1.5 g,加工作溶液100 mL溶解。
3.2.4 纖維蛋白原液:取纖維蛋白原適量,加工作溶液制成每1 mL中含1.5 mg纖維蛋白原的溶液。
3.2.5 凝血酶溶液:取凝血酶適量,加0.9%氯化鈉溶液制成每1 mL含有1 BP單位的溶液。
3.2.6 瓊脂糖-纖維蛋白原平板制備: 取纖維蛋白原溶液39 mL,置燒杯中,邊攪邊加入55 °C瓊脂糖溶液39 mL,凝血酶溶液3.0 mL,立即混勻,快速倒入直徑14 cm的塑料培養皿中,室溫水平放置1小時,打孔,備用。
3.2.7 標準品溶液制備: 取蚓激酶標準品,用0.9%氯化鈉溶液制成濃度分別為每1 mL中含有10000800060004000、2000蚓激酶單位的溶液。
3.2.8 試樣溶液制備: 取樣品適量,研細,精密稱定,加0.9%氯化鈉溶液超聲10 min,定容、搖勻。取上清液,根據標準曲線范圍進行適當稀釋。
4 儀器設備
4.1 恒溫培養箱。
4.2 不繡鋼小管,φ3 mm
4.3 天平:感量1 mg
4.4 pH計。
5 分析步驟
精密量取蚓激酶標準品溶液和試樣溶液各10 µL,分別點在同一瓊脂糖-纖維蛋白原平板上不同的小孔中,加蓋,置37°C恒溫箱中反應18小時,取出后用卡尺測量溶菌圈垂直直徑(取平均值計算溶圈面積)。以蚓激酶標準品單位數的對數為橫坐標,溶圈面積的對數為縱坐標,計算標準曲線回歸方程,將供試品溶圈面積的對數帶入標準曲線回歸方程,計算供試品效價單位數。標準品與樣品應各做兩點取平均值。
6  分析結果的表述
按下列公式計算蚓激酶的活性:
S=(D/2)2×3.14
lgS = a×lg+ b
其中:
S ——溶圈的面積,單位為mm2
D——溶圈的直徑,單位為mm
U——蚓激酶的活性,單位為U/mL
a——蚓激酶標準品計算得到的線性方程斜率;
b——蚓激酶標準品計算得到的線性方程截距。

十九、保健食品中總蒽醌的測定
Determination of total anthraquinone in health food
 
1  范圍
本方法規定了保健食品中總蒽醌的分光光度測定方法。
本方法適用于保健食品中總蒽醌的測定。
2  原理
試樣經酸水解后,有機溶劑提取總蒽醌,利用羥基蒽醌衍生物在堿性溶液中顯紅-紫紅色反應(Borntrager反應) ,采用分光光度法,以標準曲線定量檢測。
3  試劑和材料
注:除非另有說明,本方法所用試劑均為分析純,水為 GB/T 6682 規定的三級水。
3.5 試劑
3.1.1  鹽酸(HCl)
3.1.2  氨水(NH3·H2O)
3.1.3  二氯甲烷(C2H6Cl2)
3.1.4  氫氧化鈉(NaOH
3.1.5  甲醇 (CH3OH)
3.2   試劑配制
3.2.1  25%鹽酸:取鹽酸68 mL,加水稀釋至100 mL 
3.2.2  4%氨溶液:取氨水16 mL,加水稀釋至100 mL 
3.2.3  10%氫氧化鈉溶液:稱取氫氧化鈉10g,加水溶解并定容至100 mL
3.2.4  混合堿溶液:等體積10%氫氧化鈉和4%氨溶液混合。
3.3 標準品
1,8-二羥基蒽醌:純度≥99.0%
3.4  標準溶液的配制
1,8-二羥基蒽醌標準溶液:精密稱取1,8-二羥基蒽醌標準品10mg,置25mL容量瓶中,加甲醇溶解并稀釋至刻度,搖勻,制成0.4mg/mL的溶液。
4  儀器設備
4.1  分光光度計 
4.2  天平:感量為 1 mg  0.1 mg 
4.3  恒溫水浴鍋 
5  分析步驟
5.1 標準曲線 
分別精密吸取1,8-二羥基蒽醌標準溶液0mL0.2mL0.4mL0.6mL0.8mL1.0mL25mL容量瓶中,加混合堿溶液至刻度,混勻,于暗處放置30分鐘。以混合堿溶液為空白,在525nm波長處,分別測定吸光度。以濃度(mg/mL)為橫坐標,吸光度為縱坐標,繪制標準曲線。
5.2試樣測定
稱取已粉碎混合均勻的待測試樣0.10.5g(相當于每g含總蒽醌2mg17mg,精密稱定,置100mL圓底燒瓶中,精密加入甲醇-鹽酸(10:1)混合溶液25mL,稱重,在80℃水浴中加熱回流30分鐘,放冷,用甲醇補足減失的重量,搖勻,濾過,精密量取續濾液15mL至分液漏斗中,加水25mL,用二氯甲烷160mL提取4次(50mL,50mL,30mL,30mL),合并二氯甲烷液,并用水洗滌至中性,棄去水洗液,二氯甲烷層轉移至蒸發皿中蒸干,用甲醇將殘渣溶解并轉移至10mL容量瓶中,用甲醇定容至刻度,搖勻,作為試樣溶液。精密量取試樣溶液2mL, 置25mL量瓶中,加混合堿溶液至刻度,混勻,置暗處放置30分鐘,取出,迅速冷卻至室溫,稱重,補加混合堿溶液到原來重量,搖勻,測定吸光度。根據回歸方程計算試樣中總蒽醌的含量。
6  分析結果的表述
試樣中總蒽醌含量按式(1)計算:
      C×V×100
X                        ..........................................(1)
        m         
式中:
X——試樣中總蒽醌的含量,單位為毫克每百克(mg/100g);
C——由標準曲線查得測定試樣中總蒽醌的濃度,單位為毫克每毫升( mg/mL);
V——被測定試樣的最終定容體積,單位為毫升( mL);
m——試樣的稱樣質量,單位為克( g);
100——單位轉換;
計算結果以重復條件下獲得的兩次獨立測定結果的算術平均值表示,保留兩位有效數字。 
7  精密度
在重復性條件下獲得的兩次獨立測定結果的絕對差值不超過算術平均值的10%
 其他 
本方法的檢出限為1.3μg
 
 
 

二十保健食品中10-羥基癸烯酸的測定
Determination of 10-hydroxy-2-decenoic acid in health food
 
1  范圍
本方法規定了保健食品中10-羥基癸烯酸高效液相色譜測定方法。
本方法適用于保健食品中10-羥基癸烯酸的測定。
2  原理
試樣經乙醇或甲醇提取,用高效液相色譜進行測定,以保留時間定性,峰面積外標法定量
3  試劑和材料
注:除非另有說明,本方法所用試劑均為分析純,水為 GB/T6682 規定的一級水。
3.1  試劑
3.1.1鹽酸(HCL)
3.1.2 甲醇(CH3OH):色譜純。
3.1.無水乙醇(C2H6O)。
3.2  試劑配制
3.2.1  0.1mol/L鹽酸:量取鹽酸9mL,緩慢注入1000mL水
3.2.2  0.03mol/L鹽酸:量取0.1mol/L鹽酸300mL,加入700mL水
3.2.3  0.01mol/L鹽酸:量取0.1mol/L鹽酸100mL,加入900mL水
3.3  標準品
10-羥基-2-癸烯酸(C10H18O3)純度≥98%,或經國家認證并授予標準物質證書的標準物質。
3.4   標準溶液的配制
3.4.1  10-羥基癸烯酸標準儲備液(1.0mg/mL):精密稱取10 mg (精確到0.1 mg) 10-羥基-2-癸烯酸標準品于10 mL 容量瓶中,用無水乙醇溶解并定容至刻度,搖勻。
3.4.2  10-羥基癸烯酸標準工作液:分別準確吸取10-羥基癸烯酸標準儲備液0.02 mL0.mL、0.2 mL、0.5 mL、1.0 mL  10.0 mL容量瓶中,用無水乙醇稀釋至刻度,得濃度為2.0 μg/mL、10.0 μg/mL、20.0 μg/mL、50.0 μg/mL、100.0μg/mL的標準工作液。
4  儀器設備
4.1 分析天平:感量0.1mg,0.01mg
4.2 超聲波提取器。
4.3 離心機
4.4 高效液相色譜儀:配有紫外(UV)檢測器或二極管陣列(DAD)檢測器。
5  分析步驟
5.1  試樣制備
5.1.1  試樣處理
5.1.1.1  固體試樣
稱取粉碎并混合均勻的試樣0.5 g~2 g (精確到0.001 g) (含待測組分約0.1 mg ~5 mg)于50 mL容量瓶中,加0.01mol/L鹽酸2 mL加無水乙醇30 mL超聲提取20 min,放冷,用無水乙醇稀釋至刻度,搖勻,在3000r/min下離心10 min。經0.45μm有機系濾膜過濾后,取續濾液供液相色譜分析用。
5.1.1.2  軟膠囊試樣
取試樣剪開,擠出內容物并混勻,稱取0.5 g~2 g (精確到 0.001 g), 加入等量硅藻土,研至分散均勻,稱取其中部分(精確到0.001g,含待測組分約0.1 mg ~5 mg),轉移至250 mL具塞三角瓶中,并吸取0.01mol/L鹽酸2 mL無水乙醇48 mL,并入三角瓶中,稱重,加塞超聲提取20 min,放冷,用無水乙醇補足重量,搖勻,靜置澄清或取部分混懸液3000r/min離心10 min。經0.45μm有機系濾膜過濾后,取續濾液供液相色譜分析用。
5.1.1.3  液體試樣
精密量取混勻的試樣5.0 mL ~10.0 mL (含待測組分約0.1 mg ~5 mg)于50 mL容量瓶中,加甲醇30 mL超聲提取20 min,放冷,用甲醇稀釋至刻度,搖勻,在3000r/min下離心10 min。經0.45μm有機系濾膜過濾后,取續濾液供液相色譜分析用。
5.1.2  稀釋
根據試樣中10-羥基癸烯酸的含量用相應溶劑進行適當的稀釋(F),使待測溶液中10-羥基癸烯酸濃度在2.0 μg/mL~100.0 μg/mL范圍內。
5.2  液相色譜參考條件
5.2.1 色譜柱:C184.6×250mm5μm或同等性能色譜柱。
5.2.2 柱溫:35℃。
5.2.3 檢測波長:210nm
5.2.4 流動相:甲醇+0.03mol/L鹽酸+水=55+10+35。
5.2.5 流速:1.0mL/min
5.2.6 進樣量:10μL
5.3  標準曲線的制作
10-羥基癸烯酸標準工作液(3.4.2)從低濃度到高濃度分別注入高效液相色譜儀中,測定相應的峰面積。以標準工作液的濃度為橫坐標,以峰面積為縱坐標,繪制標準曲線(標準溶液液相色譜圖見附錄A中圖A.1)
5.4  待測溶液的測定
在相同色譜條件下,將待測溶液(5.1.1.1、5.1.1.2、5.1.1.3、5.1.2)注入高效液相色譜儀中,以保留時間定性,測得峰面積,根據標準曲線計算待測溶液中10-羥基癸烯酸的濃度(待測溶液液相色譜圖見附錄A中圖A.2)
6  分析結果的表述
試樣中10-羥基癸烯酸含量按式(1)計算:
    ...................................(1)
式中:
X——試樣中10-羥基癸烯酸的含量,固態試樣單位為克每百克(g/100g),液態試樣為克每百毫升(g/100mL)
ρ——根據標準曲線計算得到的待測溶液中10-羥基癸烯酸的濃度,單位為微克每毫升(μg/mL)
V——試樣稀釋或定容體積,單位為毫升(mL)
m——試樣取樣質量,單位為克 (g);試樣取樣體積,單位為毫升(mL);
F——稀釋倍數;
100——單位換算;
1000——單位換算。
計算結果以重復條件下獲得的兩次獨立測定結果的算術平均值表示,保留三位有效數字。
7  精密度
在重復性條件下獲得的兩次獨立測定結果的絕對差值不超過算術平均值的5%。
8  其他
當稱樣量為2.0 g時,定容體積為50 mL時,10-羥基癸烯酸的定量限為0.5 mg/100g
當取樣量為10.0 mL時,定容體積為50 mL時,10-羥基癸烯酸的定量限為0.1 mg/100mL
附錄 A
標準溶液和待測溶液典型高效液相色譜圖
A.1  10-羥基-2-癸烯酸標準溶液色譜圖,見圖A.1
 
A.1  10-羥基-2-癸烯酸標準溶液色譜圖
 
A.2 含有10-羥基-2-癸烯酸的待測溶液色譜圖,見圖A.2
 
A.2  含有10-羥基-2-癸烯酸待測溶液色譜圖
 
 

二十一、保健食品中絞股藍皂苷XL IX的測定
Determination of gypenoside XL IX in health food
 
1  范圍
本標準規定了保健食品中絞股藍皂苷XL IX高效液相色譜測定方法。
本標準適用于以絞股藍及其加工品為主要原料的保健食品中絞股藍皂苷XL IX含量的測定。
2  原理
試樣經過甲醇提取后,采用高效液相色譜法測定,根據保留時間定性,外標法定量。
3  試劑和材料
注:除非另有說明,本方法所用試劑均為色譜純,水為 GB/T6682 規定的一級水。
3.1 試劑
3.1.1 甲醇(CH3OH)。 
3.1.2 乙腈(CH3CN
3.2 標準品
絞股藍皂苷XL IX (C52H86O21,CAS號:94987-08-3):純度≥99.0%。
3.3 標準溶液的配制
3.3.1 絞股藍皂苷XL IX標準儲備液(5 mg/mL):稱取在60 ± 5 °C,40 kpa~53 kpa條件下減壓干燥3 h的絞股藍皂苷XL IX標準物質25 mg (精確至0.01 mg)于 5 mL 容量瓶中,用甲醇溶解并定容至刻度,搖勻。此溶液應貯存于-18°C 冰箱中。
3.3.2 絞股藍皂苷XL IX標準工作液:吸取絞股藍皂苷XL IX標準儲備液適量配置濃度分別為0.005 mg/mL、0.01 mg/mL、0.02 mg/mL、0.1 mg/mL、0.5 mg/mL、1 mg/mL 、2 mg/mL的標準工作液,臨用時配制。
4  儀器設備
4.1 高效液相色譜儀:帶紫外或二極管陣列檢測器。 
4.2 天平感量為0.1 mg 和 0.01 mg。
4.3 超聲波清洗器:功率為800W。
4.4 微孔濾膜:0.45 μm,有機相。
5  分析步驟
5.1 試樣制備
5.1.1 固體試樣
20粒以上片劑或膠囊試樣進行粉碎、混勻,或取半固態試樣混勻(軟膠囊稱取內容物),準確稱取均勻試樣0. 5 g (精確至0.0001 g) 置具塞試管中,精密加入甲醇10 mL,密塞,超聲處理5 min,冷卻至室溫,搖勻,過濾膜(0.45 μm,有機相),取濾液,待測。
5.1.2 液態試樣
移取搖勻的試樣0.5 mL于10 mL容量瓶中,加入甲醇8 mL,超聲處理5 min,冷卻至室溫,用甲醇定容至10 mL,過濾膜(0.45 μm,有機相),取濾液,待測。
5.2 色譜參考條件
5.2.1 色譜柱:十八烷基硅烷鍵合硅膠柱,柱長100 mm,內徑4.6 mm,粒徑3 μm,或性能相當者。
5.2.2 流動相:以乙腈為流動相A,以水為流動相B,按表1 中的規定進行梯度洗脫。
表1  流動相梯度洗脫表
時間(min)
流速(mL/min)
流動相A(%)
流動相B(%)
0
0.5
25
75
15
0.5
35
65
35
0.5
45
55
40
0.5
45
55
41
0.5
25
75
5.2.3 檢測波長:203 nm 
5.2.4 柱溫:40 °C
5.3 系統適用性
理論塔板數按絞股藍皂苷XL IX峰計算應不低于10000
5.4 標準曲線的制作
    將10 μL的標準系列各濃度溶液(3.3.2) ,以峰面積為縱坐標,以標準工作液中絞股藍皂苷XL IX的濃度為橫坐標,繪制標準曲線。(標準溶液液相色譜圖見附錄A中圖A.1 )。
5.5 試樣溶液的測定
將10 μL試樣溶液注入高效液相色譜儀,以保留時間定性,同時記錄峰面積,根據標準曲線得到待測液中絞股藍皂苷XL IX的濃度(試樣溶液液相色譜圖見附錄A中圖A.2)
6  分析結果的表述
試樣絞股藍皂苷XL IX含量按式(1)計算
…………………………(1)
式中
——試樣中絞股藍皂苷XL IX的含量,單位為克每百克(g/100g)或克每百升(g/100mL);
ρ —— 樣液中絞股藍皂苷XL IX的濃度,單位為 mg/mL;
V—— 稀釋體積,單位為毫升(mL);
m——試樣的質或體積,單位為克g )或毫升( mL );
100—單位轉換;
1000—單位轉換
計算結果以重復條件下獲得的兩次獨立測定結果的算術平均值表示,保留三位有效數字。
7  精密度
在重復性條件下獲得的兩次獨立測定結果的絕對差值不超過算術平均值的10% 。
 其他
當稱樣量為0.5 g或0.5 mL,定容體積為10 mL時,絞股藍皂苷XL IX的檢出限為0.005 g/100 g或0.005 g /100 mL,定量限為0.010 g/100 g或0.010 g /100 mL。

附錄 A
標準溶液和試樣溶液相色譜圖
A.1 絞股藍皂苷XL IX標準溶液色譜圖,見圖 A.1 
 
 
 A.1 絞股藍皂苷XL IX標準溶液色譜圖
A.2 含有絞股藍皂苷XL IX的試樣溶液色譜圖,見圖 A.2
 
 A.2 含有絞股藍皂苷XL IX的試樣溶液色譜圖
 
 

 二十二、保健食品中氨基葡萄糖的測定
Determination of Glucosamine in health food
 
1  范圍
本方法規定了以氨基葡萄糖為功效成分的硬膠囊、軟膠囊片劑包裝的保健食品中氨基葡萄糖的測定方法。
本方法適用于保健食品中氨基葡萄糖的含量測定。
本方法第一法紫外分光光度法的檢出限為1.5μg。第二法高效液相色譜-紫外檢測法的檢出濃度4μg /mL
第一法 紫外分光光度法
2  原理
樣品中D-氨基葡萄糖鹽酸鹽用水溶解,與乙酰丙酮對二甲氨基苯甲醛試液顯色之后以試劑空白溶液為參比,以D-鹽酸氨基葡萄糖為對照品,在525 nm波長處比色測定。
3  試劑和材料
注:除非另有說明,本方法所用試劑均為分析純,水為 GB/T6682 規定的一級水。
3.1 試劑
3.1.1乙酰丙(C5H8O2)。 
3.1.2無醛乙醇(C2H5OH)。
3.1.3碳酸鈉(NaCO3)。
3.1.4對二甲氨基苯甲醛(C9H11NO)
3.1.5鹽酸(HCl)。
3.1.6石油醚:沸程 30°C~60°C。
3.2 試劑配制
3.2.1 乙酰丙酮試液:取乙酰丙酮2 mL,加0.5 mol/L碳酸鈉溶液至50 mL,臨用前配制。
3.2.2 對二甲氨基苯甲醛試液:對二甲氨基苯甲醛0.8 g,加無醛乙醇15 mL及鹽酸15 mL,搖勻,臨用前配制。
3.3 標準品
D-鹽酸氨基葡萄糖:純度≥99.0%。
3.4 標準溶液的配制
3.4.1 鹽酸氨基葡萄糖標準儲備液(1.0 mg/mL):精確稱量105℃干燥4小時至恒重的鹽酸氨基葡萄糖對照品10mg,置于10mL容量瓶中,用水定容至刻度,搖勻,備用。
3.4.2鹽酸氨基葡萄糖標準溶液(0.1 mg/mL):精密量取1.0 ml標準儲備液,用水定容至10ml作為標準溶液。
4  儀器設備
4.1  紫外分光光度計波長525±2nm
4.2  天平感量為0.1 mg。
4.3  干燥箱。
4.4  恒溫水浴鍋。
4.5  離心機轉速 ≥3000 r/min
4.6  超聲波清洗器。
5  分析步驟
5.1 試樣制備
5.1.1片劑、硬膠囊試樣
稱取已粉碎混合均勻的待測試樣(硬膠囊稱取混合均勻的內容物)約0.1~0.5g(精確到 0.0001 g),置100mL量瓶中,加水用超聲波使其溶解,加水稀釋至刻度,搖勻,濾過;精密量取續濾液適量,置50mL量瓶中,加水稀釋至刻度,搖勻,即得供試品溶液。
5.1.2 軟膠囊制品
稱取混合均勻的油類制品 0.1 g~0.5g (精確到 0.0001 g) 至50 mL離心管中,加入50mL石油醚,輕搖溶解,3000 r/min 離心10 min,棄去上層溶液,并用氮氣吹干,用水將試樣全部轉移至100mL量瓶中,并用水分次洗滌,合并溶液至量瓶中,超聲波使其溶解,用水稀釋至刻度,搖勻,濾過;精密量取續濾液適量,置50mL量瓶中,加水稀釋至刻度,搖勻,即得供試品溶液。
5.2 標準曲線制作
吸取鹽酸氨基葡萄糖標準溶液0、0.2、0.4 、0.6、0.8、1.0、1.2mL對照品溶液,置25mL具塞比色管中,加水至5mL分別加乙酰丙酮試液(取乙酰丙酮2 mL,加0.5 mol/L碳酸鈉溶液至50 mL,臨用前配制)1 mL,搖勻,置沸水浴中加熱25分鐘,取出,用冰水迅速冷卻后,加無醛乙醇3.0 mL,60℃水浴中保溫10分鐘,再加對二甲氨基苯甲醛試液1.0 mL,強烈振搖,繼續在60℃水浴中保溫1小時,冷卻至室溫。用分光光度計在525 nm波長處以試劑空白溶液為參比,1cm比色皿測定吸光度值。以D-鹽酸氨基葡萄糖質量(μg)為橫坐標,吸光度值為縱坐標,繪制標準曲線。
5.3 試樣溶液的測定
精密吸取供試品溶液5.0mL,分別置25mL具塞比色管中,加乙酰丙酮試液1 mL,以下按“標準曲線”進行操作,測定供試品溶液吸光度值,從標準曲線査得氨基葡萄糖含量,計算,即得。
6  分析結果的表述
試樣中氨基葡萄糖(以鹽酸氨基葡萄糖計)含量按式(1)計算:
 
      Ci ×V×F×100
X                       ..........................................(1)
      m×V0×1000000           
式中:
Xi——試樣中氨基葡萄糖的含量,單位為克每百克(g/100g);
Ci——由標準曲線查得測定樣液中氨基葡萄糖含量,單位為微克(μg);
V——被測定樣液的定容體積,單位為毫升( mL);
F——被測定樣液稀釋倍數;
V0——樣品被測定時的取樣體積,單位為毫升( mL);
m——試樣的稱樣質量,單位為克( g);
100——單位轉換;
1000000——單位轉換。
計算結果以重復條件下獲得的兩次獨立測定結果的算術平均值表示,保留位有效數字。
7  精密度
在重復性條件下獲得的兩次獨立測定結果的絕對差值不超過算術平均值的 10% 。
第二法 高效液相色譜-紫外檢測法
8  原理
試樣中的氨基葡萄糖經溶解、稀釋、過濾后,使用具有紫外檢測器的高效液相色譜儀檢測,根據色譜峰的保留時間定性,外標法定量。
9  試劑和材料
注:除非另有說明,本方法所用試劑均為分析純,水為 GB/T6682 規定的一級水。
9.1 試劑
9.1.1戊烷磺酸鈉(純度≥99.5%)
9.1.2乙腈(色譜純)
9.1.3石油醚:沸程 30°C~60°C。
9.2 試劑配制
戊烷磺酸鈉溶液:稱取3.48g戊烷磺酸鈉(純度≥99.5%)用2000mL水溶解,濃度為10mmol/L。
9.3  標準品
D-鹽酸氨基葡萄糖:純度≥99.0%。
9.4  標準溶液的配制
9.4.1 鹽酸氨基葡萄糖標準儲備液(1.0 mg/mL):精確稱量105℃干燥4小時至恒重的鹽酸氨基葡萄糖對照品10mg,置于10mL容量瓶中,用水定容至刻度,搖勻,備用。
9.4.2鹽酸氨基葡萄糖標準溶液:吸取鹽酸氨基葡萄糖標準儲備液0.51.01.52.04.0mL,置10mL量瓶中,用流動相定容至10ml作為標準溶液。
10  儀器設備
10.1  高效液相色譜儀:附紫外檢測器或DAD檢測器 
10.2  天平感量為0.1 mg。
10.3  干燥箱。
10.4  超聲波清洗器。 
10.5  離心機轉速 ≥3000 r/min
11  分析步驟
11.1 試樣制備
11.1.1 試樣處理
5.1.1精密量取續濾液適量,置50mL量瓶中,加流動相稀釋至刻度后,搖勻經0.45μm濾膜過濾后即得供試品溶液。
11.2 色譜參考條件
11.2.1 色譜柱:Cl8 4.6mm×250mm不銹鋼柱。
11.2.2 柱溫:35℃。
11.2.3 檢測波長:192nm。
11.2.4 流動相:乙腈+戊烷磺酸鈉溶液=10+90。
11.2.5 流速:0.8mL/min。
11.2.6 進樣量:10μL
11.3 標準曲線制作
將10 μL的標準系列各濃度溶液(9.4.2),注入液相色譜儀中,測得相應的峰面積以標準溶液濃度為橫坐標,以峰面積為縱坐標,繪制標準曲線 (標準溶液液相色譜圖見附錄 A 中圖 A.1 )。
11.4 試樣溶液的測定
將10 μL的試樣待測液(11.1.1)注入液相色譜儀中,以保留時間定性,測得峰面積,根據標準曲線得到待測液鹽酸氨基葡萄糖濃度(樣品溶液液相色譜圖見附錄A中圖A.2)。
12  分析結果的表述
試樣中氨基葡萄糖(以鹽酸氨基葡萄糖計)含量按式(2)計算:
 
      Ci ×V×F×100
X                       ..........................................(2)
        m×1000000           
式中:
Xi——試樣中氨基葡萄糖的含量,單位為克每百克(g/100g);
Ci——由標準曲線查得測定樣液中鹽酸氨基葡萄糖含量,單位為微克(μg/mL);
V——被測定樣液的定容體積,單位為毫升( mL);
F——被測定樣液稀釋倍數;
m——試樣的稱樣質量,單位為克( g);
100——單位轉換;
1000000——單位轉換。
計算結果以重復條件下獲得的兩次獨立測定結果的算術平均值表示,保留位有效數字。
13  精密度
在重復性條件下獲得的兩次獨立測定結果的絕對差值不超過算術平均值的 10% 。

錄 A
標準溶液和試樣溶液典型液相色譜圖
A.1 鹽酸氨基葡萄糖標準溶液色譜圖,見圖 A.1 
 
 A.1 鹽酸氨基葡萄糖標準溶液色譜圖
A.2 含有氨基葡萄糖的試樣溶液色譜圖,見圖 A.2 
 
 A.2 含有氨基葡萄糖的試樣溶液色譜圖

二十三、保健食品中總三萜的測定
Determination of total triterpenes in health food
 
1  范圍
本方法規定了保健食品中總三萜的紫外-可見分光光度測定方法。
本方法適用于以三萜類成分為主要原料的保健食品中總三萜含量的測定。
2  原理
試樣用氯仿提取出的三萜類物質,在高氯酸的作用下與香草醛反應產生有色物質。以熊果酸為對照品,采用分光光度法測定總三萜在548nm波長下的吸光度進行定量。
3  試劑和材料
除非另有說明,本方法所用試劑均為分析純,水為 GB/T6682 規定的一級水。
試劑
3.1.1 乙酸乙酯( CH3COOCH2CH3)
3.1.2 氯仿(CHCl3)
3.1.3 冰乙酸(CH3COOH)
3.1.4 高氯酸(HClO4
3.1.5 香草醛(C8H8O3
試劑配制
5%香草醛冰乙酸溶液:此溶液臨用前配制。精密稱取香草醛 0.5g,加冰乙酸使溶解成 10mL,即得。
標準品
熊果酸(C30H48O3):中國食品藥品檢定研究院,含量:≥93.8%
標準溶液的配制
熊果酸對照品溶液(100μg/mL):精密稱取熊果酸對照品10mg至100mL容量瓶中,加乙酸乙酯溶解并稀釋至刻度,搖勻。
4  儀器設備
4.1  紫外-可見分光光度計。 
4.2  分析天平精確至0.1 mg
4.3  恒溫水浴鍋。
4.4  超聲波清洗器
4.5  離心機
5  分析步驟
5.1試樣制備
5.1.1 固體試樣 
取一定量混勻試樣,精密稱定(試樣中總三萜的量約為0.5~5mg),置50mL量瓶中,加氯仿約30mL,超聲處理30 min,放冷,加氯仿至刻度,搖勻。 
5.1.2 油類制品 
準確稱取混勻試樣適量(試樣中總三萜的量約為0.5~5mg,置于100 mL容量瓶中,用乙酸乙酯溶解并稀釋至刻度,搖勻。
5.2 標準曲線的制作
分別精密吸取熊果酸對照品溶液0.10.20.40.81.0mL蒸發皿中,于60℃水浴上蒸干,精密加入0.4mL5%香草醛冰乙酸溶液,轉動蒸發皿使殘渣溶解,再精密加1.0mL高氯酸,混勻后移入10mL具塞比色管中,置60℃水浴加熱15min,取出,冰浴冷卻后,精密加入冰乙酸5.0mL搖勻,15min后以1cm比色池于548nm波長測定吸光度, 以吸光度為縱坐標、濃度為橫坐標繪制標準曲線。
5.3 試驗溶液的測定
精密量取5.1項下試樣上清液1.0mL置蒸發皿中,于60水浴上蒸干。照5.2標準曲線的制作項下,自“精密加入0.4mL5%香草醛冰乙酸溶液……”起,同法操作,測定吸光度,從標準曲線上讀出供試品溶液中熊果酸的含量。
6  分析結果的表述
試樣中總三萜含量按下式計算:
Xi
Xi-試樣中總三萜含量(以熊果酸計),單位為克每百克(g/100g);
Ci-由標準曲線查得測定樣液中總三萜質量,單位為微克(μg)
m-試樣的稱樣質量,單位為克(g)
V1-試樣定容總體積,單位為毫升(mL);
V2-測定用試樣體積,單位為毫升(mL)。
計算結果以重復條件下獲得的兩次獨立測定結果的算術平均值表示,保留三位有效數字。 
7  精密度
在重復性條件下獲得的兩次獨立測定結果的絕對差值不超過算術平均值的 10% 
8  其他
本方法定量限為1.5μg 
 

二十四、保健食品中蟲草素的測定
Determination of Content of Cordycepin in health food
 
1  范圍
本方法規定了保健食品中蟲草素相色譜測定方法。
本方法適用于保健品食品中蟲草素的測定。
2  原理
試樣經酸水溶解,加偏磷酸溶液沉淀干擾物質,反相色譜分離,與標準品的保留時間比較定性,以峰面積外標法定量。
3  試劑和材料
注:除非另有說明,本方法所用試劑均為分析純,水為 GB/T6682 規定的一級水。
3.1 試劑
3.1.1 偏磷酸(HPO3):分析純
3.1.2 甲醇(CH3OH):色譜純。
3.2 試劑配制
偏磷酸溶液(30.0g/L)稱取30.0g偏磷酸于裝有約600mL水的三角瓶中,在磁力攪拌器攪拌上溶解,轉移至1000mL容量瓶中,用水定容至1000mL,混勻。
3.3 標準品
蟲草素(C10H13N5O3):純度≥98.0%。
3.4 標準溶液的配制
3.4.1蟲草素標準儲備溶液(0.5 mg/mL):稱取標準品25mg于50mL容量瓶中,用水溶解并定容至刻度 ,搖勻。此溶液應貯存于-18°C 冰箱中。
3.4.2 蟲草素標準工作液:吸取蟲草素標準儲備溶液0.10mL、0.20mL、0.5mL、1.0mL、2.0mL、5.0 mL 于 50.0 mL 容量瓶中,用定容,得濃度為 1 mg/mL、2mg/mL、5mg/mL、10 mg/mL、20 mg/mL、50 mg/mL 的標準工作液,臨用時配制。
4  儀器設備
4.1  高效液相色譜儀: 附紫外檢測器(UV)。
4.2  天平:感量為 1 mg 和 0.1 mg。
4.3 超聲波清洗器。
4.4  離心機:轉速 ≥4000 r/min。
4.5  磁力攪拌器
5  分析步驟
5.1 試樣制備
5.1.1 試樣處理
5.1.1.1  固體樣品:取20粒以上片劑或膠囊試樣進行粉碎、混勻,或取半固態試樣混勻(軟膠囊稱取內容物),準確稱取均勻試樣1g(可根據樣品中含量而定,精確至0.001g)50mL容量瓶中,加水30mL,混勻,超聲震蕩30min,加入30.0g/L偏磷酸溶液(3.2)1.0mL,輕輕振蕩,加水稀釋至刻度,搖勻。樣品經0.45μm 濾膜過濾后進液相色譜分析。
5.1.1.2  液體樣品:準確吸取一定量搖勻后的試樣10 mL(可根據試樣含量而定)50 mL容量瓶中,加水20mL,混勻,超聲震蕩30min,加入30.0g/L偏磷酸溶液(3.2)1.0mL,輕輕振蕩,加水稀釋至刻度,搖勻。樣品經0.45μm 濾膜過濾后進液相色譜分析。
5.2色譜參考條件
5.2.1  色譜柱:C18柱,4.6×250 mm, 5 μm或同等性能色譜柱。
5.2.2  柱溫:30 
5.2.3  檢測波長:260 nm
5.2.4  流動相:甲醇-水=15:85
5.2.5  流速:1.0 mL/min
5.2.6  進樣量:10 mL
5.3 標準曲線的制作
將10 μL的標準系列各濃度溶液(3.4.2,注入相色譜儀中,測得相應的峰面積或峰高, 以標準工作液的濃度為橫坐標,以峰面積或峰高為縱坐標,繪制標準曲線 (標準溶液相色譜圖見附錄 A 中圖 A.1 )。
5.4 試驗溶液的測定
將 10 μL 的試樣待測液(5.1.1)注入相色譜儀中,以保留時間定性,測得峰面積或峰高,根據標準曲線得到待測液蟲草素的濃度(樣品溶液相色譜圖見附錄A中圖A.2)。
6  分析結果的表述
試樣中蟲草素含量按式(1)計算:
 
      Ci ×V×100
X                       ..........................................(1)
        m×1000000           
式中:
Xi——試樣中蟲草素的含量,單位為克每百克克每百毫升(g/100g/g/100mL);
Ci——由標準曲線查得測定樣液中蟲草素的濃度,單位為克每毫升(mg/mL);
V——被測定樣液的最終定容體積,單位為毫升( mL);
m——測定用試樣的量,單位為克或毫升( g或mL);
100——單位轉換;
1000000——單位轉換。
計算結果以重復條件下獲得的兩次獨立測定結果的算術平均值表示,保留兩位有效數字。
7  精密度
在重復性條件下獲得的兩次獨立測定結果的絕對差值不超過算術平均值的 10% 。
8 其他
當稱樣量為1 g,定容體積為 50 mL時,蟲草素定量限為0.0010 g/100g。
 

 
附錄 A 
標準溶液和試樣溶液典型相色譜圖
A.1 蟲草素標準溶液色譜圖,見圖 A.1 
 A.1 蟲草素標準溶液色譜圖
A.2 含有蟲草素的試樣溶液色譜圖,見圖 A.2 
 
 A.2 含有蟲草素的試樣溶液色譜圖

二十五、保健食品中蟲草酸的測定
Determination of mannitol in health food
                                                                               
 
1  范圍
本方法規定了保健食品中蟲草酸(甘露醇)的高效液相色譜法測定方法。
本方法適用于保健食品中蟲草酸(甘露醇)含量的測定。
2  原理
試樣中的蟲草酸經提取后在氨基色譜柱上分離,用蒸發光散射檢測器檢測,根據保留時間定性,標準曲線法定量檢測。
3  試劑和材料
   注:除非另有說明,本方法所用試劑均為分析純,水為 GB/T6682 規定的一級水。
3.1 試劑
3.1.1  乙腈(C2H3N):色譜純。
3.1.2  無水乙醇(C2H5OH)
3.2 試劑配制
提取液:取40mL水與60mL無水乙醇(3.1.2)混合,即得。
標準品
蟲草酸(D-甘露醇)對照品:純度≥99%
標準溶液的配制
蟲草酸標準溶液(10.0mg/mL): 準確稱量蟲草酸標準品0.250 g,加入水溶解后,用水定容至25 mL,即得蟲草酸標準溶液 
標準系列溶液制備:精密吸取蟲草酸標準溶液0.1mL0.2mL0.5mL1.0mL2.0mL4.0mL分別置于10mL容量瓶中,用水定容至刻度,搖勻。臨用時配制。
4  儀器
4.1  高效液相色譜儀: 附蒸發光散射檢測器(ELSD)。
4.2  超聲波清洗器。
4.3  離心機:轉速≥4000r/min
4.4  分析天平:感量0.01 mg0.1 mg
5  分析步驟
5.1  試樣處理
5.1.1  固體樣品:取20粒以上片劑或膠囊試樣進行粉碎、混勻,或取半固態試樣混勻(軟膠囊稱取內容物),準確稱取均勻試樣0.5 g(可根據樣品中含量而定,精確至0.001g),置圓底燒瓶中,加入25mL提取液(3.2),混勻,稱重水浴回流60min,取出,冷卻后稱重補足減失的重量,搖勻,經0.45μm微孔濾膜過濾,濾液待分析。
5.1.2  液體樣品:準確吸取一定量搖勻后的試樣10 mL(可根據試樣含量而定)于25 mL容量瓶中,加入無水乙醇(3.1.2)10mL,混勻,超聲振蕩30min,取出,冷卻,定容至刻度。混勻后經0.45 μm濾膜過濾,供液相色譜分析用。
5.2  色譜參考條件
5.2.1  色譜柱:氨基液相色譜柱,4.6×250 mm, 5 μm或同等性能色譜柱。
5.2.2  流動相:流動相A為水,流動相B為乙腈。水-乙腈=25:75。
5.2.3  柱溫:30℃。
5.2.4  流速:1.0 mL/min
5.2.5  進樣量:10 mL
5.2.6  蒸發光散射檢測器:氣體流速:1.60slm,漂移管溫度:60℃, 增益:1 
5.3 標準曲線制備  
分別配制一系列蟲草酸標準溶液,在給定的儀器條件下進行液相色譜分析,以蟲草酸的濃度(C)的對數LogC為橫坐標,相應的色譜峰面積(A)的對數LogA為縱坐標,繪制標準曲線。
6  測定
10 μL標準溶液及試樣溶液注入色譜儀中,以保留時間定性,以試樣峰面積與標準系列比較定量。
7  結果計算
試樣中蟲草酸含量按式(1)計算:
      
             Xi =..........................................(1)
式中:
Xi——試樣中蟲草酸的含量,單位為克每百克或克每百毫升(g/100gg/100mL);
Ci——由標準曲線查得測定樣液中蟲草酸的濃度,單位為毫克每毫升( mg/mL);
V——被測定樣液的定容體積,單位為毫升( mL);
m——試樣的稱樣質量,單位為克或毫升( gmL);
100——單位轉換;
1000——單位轉換。 
計算結果以重復條件下獲得的兩次獨立測定結果的算術平均值表示,保留兩位有效數字。 
 精密度
在重復性條件下獲得的兩次獨立測定結果的絕對差值不超過算術平均值的 10%  
9  其他
本方法檢出限為0.1μg
蒸發光散射檢測器的響應值(y)與被測物濃度(x)的關系曲線由于儀器品牌和結構的不同,大多可能是指數關系,即y=axb,也可根據實際情況選擇合適的關系曲線。
 

附錄 A
標準溶液和試樣溶液典型色譜圖
A.1 蟲草酸標準溶液色譜圖,見圖 A.1  
 
 
圖A.1 蟲草酸標準溶液色譜圖
A.2 含有蟲草酸的試樣溶液色譜圖,見圖 A.2
 
圖A.2 含有蟲草酸的試樣溶液色譜圖

 
部分
 
十一種溶劑殘留的測定
Determination of 11 kinds of
Residual Organic Solvents

1  范圍
本標準規定了保健食品中甲醇、正丁醇、異丁醇、氯仿、正己烷、甲苯、對二甲苯、鄰二甲苯、苯乙烯、1,2-二乙基苯和二乙烯苯11種溶劑殘留的氣相色譜測定方法。
本標準適用于保健食品中甲醇、正丁醇、異丁醇、氯仿、正己烷、甲苯、對二甲苯、鄰二甲苯、苯乙烯、1,2-二乙基苯和二乙烯苯11種溶劑殘留的測定。
2  原理
樣品經50% N,N-二甲基甲酰胺溶液提取后,采用頂空-氣相色譜法測定,用外標法定量。
3  試劑和材料
注:除非另有說明,本方法所用試劑均為分析純,水為 GB/T6682 規定的一級水。
3.5 試劑
N,N-二甲基甲酰胺(HCON(CH3)2):色譜純
3.6 試劑配置
   50%的N,N-二甲基甲酰胺溶液: 500 mL N,N-二甲基甲酰胺與500 mL水充分互溶混合。
3.7 標準品
甲醇(CH4O)、正丁醇(CH3(CH2)3OH)、異丁醇(CH3CH(CH3)CH2OH)、氯仿(CHCl3)、正己烷(C6H14)、甲苯(C7H8)、對二甲苯(C8H10)、鄰二甲苯(C8H10)、苯乙烯(C8H8)、1,2-二乙基苯(C10H14)和二乙烯苯(C10H10)標準品:純度≥97.0%。
3.8 標準溶液的配制
3.4.1 標準儲備液:分別準確稱取2500 mg(精確至0.1 mg) 甲醇,1200 mg(精確至0.1 mg)正丁醇、異丁醇、氯仿、120 mg(精確至0.1 mg)正己烷和二乙烯苯,100 mg(精確至0.1 mg)甲苯、對二甲苯、鄰二甲苯、苯乙烯、1,2-二乙基苯于100 mL容量瓶中,N,N-二甲基甲酰胺定容至刻度 ,搖勻。得甲醇濃度為25 mg/mL、正丁醇、異丁醇、氯仿濃度為12 mg/mL,正己烷和二乙烯苯濃度為1.2 mg/mL,甲苯、對二甲苯、鄰二甲苯、苯乙烯、1,2-二乙基苯濃度為1mg/mL標準儲備液,4°C保存
3.4.2混合標準中間液:分別準確吸取2.0 mL甲醇標準儲備液;1.0 mL 正丁醇、異丁醇、氯仿、正己烷、二乙烯苯甲苯、對二甲苯、鄰二甲苯、苯乙烯、1,2-二乙基苯、標準儲備液于同一100 mL 容量瓶中,用50%的N,N-二甲基甲酰胺溶液定容至刻度 ,搖勻。該混合標準中間液中甲醇濃度為500 μg/mL,正丁醇、異丁醇、氯仿濃度為120 μg/mL,正己烷、二乙烯苯濃度為12.0 μg/mL,甲苯、對二甲苯、鄰二甲苯、苯乙烯、1,2-二乙基苯濃度為10.0 μg/mL。該中間液放置4°C保存
3.4.3 混合標準工作液:準確吸取混合標準中間液0.05 mL0.20 mL、0.50 mL、1.0 mL、2.0 mL、5.0 mL于10.0 mL 容量瓶中,用50% N,N-二甲基甲酰胺定容,得甲醇濃度為2.50 μg /mL 、10.0 μg /mL、25.0 μg /mL、50.0 μg /mL、100 μg /mL、250 μg /mL正丁醇、異丁醇、氯仿濃度為0.60 μg /mL 、2.40 μg /mL、6.00 μg /mL、12.0 μg /mL、24.0 μg /mL、60.0 μg /mL,正己烷、二乙烯苯濃度0.06 μg /mL 、0.24μg /mL、0.60 μg /mL、1.20 μg /mL、2.40 μg /mL、6.00 μg /mL;甲苯、對二甲苯、鄰二甲苯、苯乙烯、1,2-二乙基苯濃度0.05 μg /mL 、0.20 μg /mL、0.50 μg /mL、1.00 μg /mL、2.00 μg /mL、5.00 μg /mL的標準工作液,臨用時配制。
4  儀器設備
4.1  氣相色譜儀配有氫火焰離子化檢測器( FID)。
4.2  頂空自動進樣器。
4.3  頂空瓶:20 mL,配備鋁蓋和不含烴類溶劑殘留的丁基橡膠或硅樹脂膠隔墊
4.4  天平感量為 1 mg 和 0.1 mg。
4.5  離心機轉速 ≥4000 r/min。
4.6  超聲波清洗器。
5  分析步驟
5.1 試樣制備
5.1.1 固體基質
稱取樣品0.5 g (精確到0.001 g20 mL頂空瓶中,加入5 mL50% N,N-二甲基甲酰胺溶液搖勻后密封超聲處理10 min,即得。
5.1.2 液體基質
稱取樣品1.0 g至2.0 g (精確到0.001 g于10 mL容量瓶中,加入50% N,N-二甲基甲酰胺溶液定容至刻度,搖勻,準確吸取5 mL溶液至20mL頂空瓶中,密封,即得。
5.2儀器參考條件 
5.2.1頂空進樣參考條件
 a) 平衡時間:30 min
b) 平衡溫度:90 °C
c) 進樣體積:1.0 mL
5.2.2色譜參考條件
 a)  色譜柱:以鍵合/交聯聚乙二醇為固定相的毛細管柱,柱長為30 m,內徑為0.32 mm,膜厚度為0.50 μm或性能相當者
b)  柱溫箱溫度:起始溫度40 °C,保持5 min ,10 °C/min 升溫至 150 °C,保持1 min,再以20 °C/min升至200 °C保持2 min。
c)  進樣口溫度:200 °C
d)  分流比:151
e)   FID 檢測器溫度:250°C。
f)   載氣:高純氮氣,流量 1.5 mL/min,尾吹 30 mL/min。
g)   氫氣流量:40 mL/min
h)   空氣流量:300 mL/min。
5.3 標準曲線的制作
準確吸取3.4.2中各濃度的標準工作溶液5 mL置于頂空瓶中,進行氣相色譜測定,測得相應的峰面積, 以標準工作液中相應溶劑的濃度為橫坐標,以峰面積為縱坐標,繪制標準曲線 (標準溶液氣相色譜圖見附錄 A 中圖 A.1 )。
5.4 試驗溶液的測定
5.1中試樣待測液進行氣相色譜儀測定,以保留時間定性,測得峰面積,根據標準曲線計算試樣中各溶劑殘留的含量。
6  分析結果的表述
試樣中各溶劑殘留含量按式(1)計算:
 
  ………………………(1)
式中
X——試樣中各溶劑殘留的含量,單位為毫克每千克(mg/kg)
C——由標準曲線查得測定樣液中各溶劑殘留的濃度,單位為微克每毫升(μg/mL)
m——試樣的稱樣質量,單位為克( g)
V——頂空瓶中供試樣溶液的體積,單位為毫升(mL); 
計算結果以重復條件下獲得的兩次獨立測定結果的算術平均值表示,保留三位有效數字。
7  精密度
在重復性條件下獲得的兩次獨立測定結果的絕對差值不超過算術平均值的 1% 。
8  其他
當稱樣量為0.5 g 時,甲醇的檢出限為4 mg/kg,定量限為10 mg/kg,正丁醇、異丁醇、氯仿檢出限為2 mg/kg,定量限為6 mg/kg,正己烷、二乙烯苯的檢出限為0.2 mg/kg,定量限為0.6 mg/kg,甲苯、對二甲苯、鄰二甲苯、苯乙烯、1,2-二乙基苯、二乙烯苯檢出限為0.08 mg/kg,定量限為0.30 mg/kg
 

附錄 A
11種溶劑標準物質的典型氣相色譜圖
11種溶劑的標準物質的氣相色譜圖見圖A.1
 
 
圖A.1 11種溶劑標準物質的氣相色譜圖
1:正己烷 2:甲醇 3:氯仿 4:甲苯 5:異丁醇 6:對二甲苯 7:正丁醇 8:鄰二甲苯 9:苯乙烯 10:二乙基苯 11:二乙烯苯

 
部分
 
興奮劑及違禁成分測定
Determination of Stimulant and 
Prohibited Components

興奮劑及違禁成分測定
產品功能
興奮劑、違禁成分
檢驗方法編號
緩解體力疲勞、
增強免疫力
2-羥丙基去甲他達拉非 ; 2-羥乙基去甲他達拉非 ; N-苯丙烯基他達拉非 ; N-丁基他達拉非 ; N-去甲基西地那非 ; N-去乙基-N-甲基伐地那非 ; N-去乙基伐地那非 ; N-去乙基紅地那非 ; N-叔丁氧羰基-N-去乙基紅地那非 ; N-辛基去甲他達拉非 ; N-乙基他達拉非 ; O-去乙基西地那非 ; 阿伐那非 ; 艾地那非 ; 氨基他達拉非 ; 氨基西地那非 ; 苯噻啶紅地那非 ; 苯酰胺那非 ; 吡唑N-去甲基西地那非 ; 芐西地那非 ; 丙氧苯基艾地那非 ; 丙氧苯基硫代艾地那非 ; 丙氧苯基硫代豪莫西地那非 ; 丙氧苯基硫代羥基豪莫西地那非 ; 丙氧苯基硫代西地那非 ; 丙氧苯基羥基豪莫西地那非 ; 丙氧苯基西地那非 ; 丙氧苯基異丁基艾地那非 ; 達泊西汀 ; 二甲基紅地那非 ; 二硫代去甲基卡巴地那非 ; 二硫代去乙基卡巴地那非 ; 伐地那非 ; 伐地那非N-氧化物 ; 伐地那非二聚體 ; 伐地那非哌嗪酮 ; 伐地那非乙酰基類似物 ; 桂地那非 ; 豪莫西地那非 ; 紅地那非 ; 環戊那非 ; 卡巴地那非 ; 硫代艾地那非 ; 硫代豪莫西地那非 ; 硫代西地那非 ; 硫喹哌非 ; 羅地那非碳酸酯 ; 氯地那非 ; 米羅那非 ; 那非乙酰酸 ; 那紅地那非 ; 那莫伐地那非 ; 那莫西地那非 ; 哌唑那非 ; 羥基伐地那非 ; 羥基豪莫西地那非 ; 羥基紅地那非 ; 羥基硫代伐地那非 ; 羥基硫代豪莫西地那非 ; 羥基硫代紅地那非 ; 羥基氯地那非 ; 慶地那非 ; 去甲基卡巴地那非 ; 去甲基硫代西地那非 ; 去甲基哌嗪基西地那非磺酸 ; 去甲基他達拉非 ; 去碳西地那非 ; 去乙基卡巴地那非 ; 雙氯地那非 ; 雙去碳西地那非 ; 雙酮紅地那非 ; 他達拉非 ; 他達拉非二氯代雜質 ; 他達拉非甲基氯化物 ; 酮紅地那非 ; 脫硫伐地那非 ; 脫哌嗪基硫代西地那非 ; 偽伐地那非 ; 烏地那非 ; 西地那非 ; 西地那非N-氧化物 ; 西地那非二聚體雜質 ; 西地那非雜質12 ; 西地那非雜質14 ; 硝地那非 ; 亞硝地那非 ; 乙酰胺基他達拉非 ; 乙酰伐地那非 ; 異丁基西地那非 ; 育亨賓
食品中那非類物質的測定(BJS 201805);
 
補腎壯陽類中成藥中西地那非及其類似物的檢測方法(國家食品藥品監督管理局藥品檢驗補充檢驗方法和檢驗項目批準件2008016)
 
補腎壯陽類中成藥中PDE5型抑制劑的快速檢測方法(國家食品藥品監督管理局藥品檢驗補充檢驗方法和檢驗項目批準件2009030)
減肥
N,N-雙去甲基西布曲明 ; N-單去甲基西布曲明 ; 安非他明 ; 安非他酮 ; 奧利司他 ; 苯丙醇胺 ; 苯扎貝特 ; 比沙可啶 ; 芐基西布曲明 ; 布美他尼 ; 非諾貝特 ; 分特拉明 ; 芬氟拉明 ; 酚酞 ; 呋塞米 ; 氟西汀 ; 豪莫西布曲明 ; 甲基安非他明 ; 甲基麻黃堿 ; 咖啡因 ; 利莫那班 ; 洛伐他汀 ; 氯代西布曲明 ; 氯卡色林 ; 氯噻嗪 ; 麻黃堿 ; 普伐他汀 ; 氫氯噻嗪 ; 去甲偽麻黃堿 ; 偽麻黃堿 ; 西布曲明 ; 辛伐他汀 ; 吲達帕胺
食品中西布曲明等化合物的測定(BJS 201701);
 
治療肥胖癥的中成藥中西布曲明、麻黃堿、芬氟拉明的檢測方法(國家食品藥品監督管理局藥品檢驗補充檢驗方法和檢驗項目批準件2006004);
 
減肥類保健食品違法添加藥物的檢測方法(食藥監辦許(2010)114號);
 
減肥類中成藥或保健食品中酚酞、西布曲明及兩種衍生物的檢測方法(國家食品藥品監督管理局藥品檢驗補充檢驗方法和檢驗項目批準件2012005)。
輔助降血糖、
輔助降血脂、
輔助降血壓、
改善睡眠
阿普唑侖 ; 阿替洛爾 ; 艾司唑侖 ; 氨甲環酸 ; 氨氯地平 ; 奧沙西泮 ; 巴比妥 ; 苯巴比妥 ; 苯乙雙胍 ; 吡咯列酮 ; 醋氯芬酸 ; 地西泮 ; 丁二胍 ; 二甲雙胍 ; 二氧丙嗪 ; 非洛地平 ; 格列苯脲 ; 格列吡嗪 ; 格列波脲 ; 格列喹酮 ; 格列美脲 ; 格列齊特 ; 甲苯磺丁脲 ; 卡托普利 ; 可樂定 ; 勞拉西泮 ; 利血平 ; 羅格列酮 ; 羅通定 ; 洛伐他汀羥酸鈉鹽 ; 氯苯那敏 ; 氯氮卓 ; 氯美扎酮 ; 氯硝西泮 ; 美伐他汀 ; 咪達唑侖 ; 尼莫地平 ; 尼群地平 ; 尼索地平 ; 哌唑嗪 ; 青藤堿 ; 瑞格列奈 ; 三唑侖 ; 沙丁胺醇 ; 司可巴比妥 ; 褪黑素 ; 脫羥基洛伐他汀 ; 文拉法辛 ; 硝苯地平 ; 硝西泮 ; 煙酸 ; 異戊巴比妥 ; 扎來普隆 ; 佐匹克隆
保健食品中75種非法添加化學藥物的檢測(BJS 201710);
 
降糖類中成藥中非法添加化學藥品補充檢驗方法(國家食品藥品監督管理局藥品檢驗補充檢驗方法和檢驗項目批準件2009029);
 
降糖類中成藥中非法添加鹽酸丁二胍補充檢驗方法(國家食品藥品監督管理局藥品檢驗補充檢驗方法和檢驗項目批準件2011008);
 
降糖類中成藥和輔助降血糖類保健食品中非法添加格列波脲的補充檢驗方法(國家食品藥品監督管理局藥品檢驗補充檢驗方法和檢驗項目批準件2013001);
 
輔助降血脂類保健食品違法添加藥物的檢測方法(食藥監辦許(2010)114號);
 
保健食品中非法添加沙丁胺醇檢驗方法等8項檢驗方法(食藥監食監三[2016]28號);
 
降壓類中成藥中非法添加化學藥品補充檢驗方法(國家食品藥品監督管理局藥品檢驗補充檢驗方法和檢驗項目批準件2009032);
 
降壓類中成藥和輔助降壓類保健食品中非法添加六種二氫吡啶類化學成分檢測方法(國家食品藥品監督管理局藥品檢驗補充檢驗方法和檢驗項目批準件2014008);
 
安神類中成藥中非法添加化學品檢測方法(國家食品藥品監督管理局藥品檢驗補充檢驗方法和檢驗項目批準件2009024);
 
安神類中成藥和保健食品中非法添加褪黑素、佐匹克隆、氯苯那敏、扎來普隆的補充檢驗方法(國家食品藥品監督管理局藥品檢驗補充檢驗方法和檢驗項目批準件2012004);
 
改善睡眠類中成藥及保健品中非法添加羅通定、青藤堿、文拉法辛補充檢驗方法(國家食品藥品監督管理局藥品檢驗補充檢驗方法和檢驗項目批準件2013002)。
 
 
 
 
部分
 
不同劑型及特定原料類別產品的
衛生學檢測項目
Hygienic Testing Items for Products with Different Dosage Forms and Specific RawMaterials

不同劑型及特定原料類別產品的衛生學檢測項目
 
產品類型
檢測項目
1
固體
水分、灰分
2
口服液
可溶性固形物、pH值、防腐劑
3
片劑和膠囊劑
崩解時限
4
茶劑
水分、有機氯農藥殘留(六六六、滴滴涕)
5
丸劑
融散時限
6
含片
溶化性
7
顆粒劑     
溶化性、粒度
8
酒劑
總固體、酒精度、甲醇、氰化物(蒸餾酒
9   
魚油類軟膠囊
酸價、過氧化值(降血脂類產品需檢測膽固醇)
10
中藥材
六六六、滴滴涕以及藥典規定相關其他農藥、重金屬及有害元素
11
蘋果、山楂  
展青霉素
12
乳產品                 
黃曲霉毒素M1M2、防腐劑
13
蜂蜜、蜂膠類產品
抗生素
14
海產品
鎘、砷、汞
15
紅曲
黃曲霉毒素B1B2G1G2、桔青霉素
16
植物油
黃曲霉毒素B1、酸價、過氧化值
 

 
部分
 
特定原料類別產品的功效成分和
標志性成分檢測項目
Testing Items for Functional and Iconic Components of Products with Specific RawMaterial

特定原料類別產品的功效成分和標志性成分檢測項目
 
原料類別
檢測項目
1
營養素補充劑
產品中標識的營養素(包括維生素和礦物質) 
2
五加科參類
皂苷
3
蕈類(蘑菇等)
膳食纖維、多糖、總三萜(靈芝類)
4
蟲草類
腺苷
5
紅景天類
紅景天苷
6
蘆薈類
蘆薈苷
7
大蒜類
大蒜素
8
螺旋藻類
蛋白質、胡蘿卜素、維生素B1、維生素B2
9
茶葉類
茶多酚
10
魔芋類
膳食纖維
11
纖維素類
膳食纖維
12
磷脂類
丙酮不溶物、乙醇可溶物、正己烷不溶物(卵磷脂原料)等
13
紅曲類
洛伐他汀
14
植物油類
脂肪酸、維生素E
15
動物油類
脂肪酸
16
初乳類
免疫球蛋白
17
鹿血類
蛋白質、氨基酸
18
螞蟻類
錳、蛋白質
19
蚯蚓類
蚓激酶(溶纖酶)、蛋白質
20
蛇、蝎等
蛋白質、氨基酸
21
角鯊烯
角鯊烯
22
蜂皇漿
10-羥基癸烯酸
23
蜂花粉、蜂膠
總黃酮
24
甲殼質產品
脫乙酰度,產品如為復方應檢測原料的脫乙酰度
25
蛋白質、氨基酸制品
蛋白質、氨基酸
26
褪黑素產品
產品原料(褪黑素)需提供原料純度證明并檢測
27
輔酶Q10產品          
產品原料(輔酶Q10)需提供制備工藝及純度證明并檢測
28
含蒽醌類成分的原料
總蒽醌
29
阿膠類
雜皮特征肽
 

附錄
1  部分功效成分/標志性成分檢測方法國家標準
序號
功效成分/標志性成分
標準號
1
α-亞麻酸、二十碳五烯酸、二十二碳五烯酸、二十二碳六烯酸
GB 28404
2
前花青素
GB/T 22244
3
異嗪皮啶
GB/T 22245
4
泛酸鈣
GB/T 22246
5
淫羊藿苷
GB/T 22247
6
甘草酸
GB/T 22248
7
番茄紅素
GB/T 22249
8
綠原酸
GB/T 22250
9
葛根素
GB/T 22251
10
輔酶Q10
GB/T 22252
11
大豆異黃酮
GB/T 23788
12
褪黑素
GB/T 5009.170
13
超氧化物歧化酶(SOD)
GB/T 5009.171
14
脫氫表雄甾酮
GB/T 5009.193
15
免疫球蛋白IgG
GB/T 5009.194
16
吡啶甲酸鉻
GB/T 5009.195
17
肌醇
GB/T 5009.196
18
鹽酸硫胺素、鹽酸吡哆醇、煙酸、煙酰胺、咖啡因
GB/T 5009.197
19
維生素B12
GB/T 5009.217
20
維生素K1
GB 5009.158
21
維生素B6
GB 5009.154
22
維生素B2
GB 5009.85
23
維生素B1
GB 5009.84
24
維生素A、D、E
GB 5009.82
25
硼、鈉、鎂、鋁、鉀、鈣、鈦、釩、鉻、錳、鐵、鈷、鎳、銅、鋅、砷、硒、鍶、鉬、鎘、錫、銻、鋇、汞、鉈、鉛、磷
GB 5009.268
26
大豆低聚糖
GB/T 22491
27
低聚異麥芽糖
GB/T 20881
28
低聚果糖
GB/T 23528
29
磷脂酰膽堿、磷脂酰乙醇胺、磷脂酰肌醇
GB 5009.272
30
硫酸軟骨素和鹽酸氨基葡萄糖
GB/T 20365
 

附錄2 常用衛生指標檢測方法
序號 衛生指標   常用檢測方法 序號 衛生指標 常用檢測方法
1 GB 5009.12 11 水分 GB 5009.3
2 GB 5009.11 12 灰分 GB 5009.4
3 GB 5009.17 13 過氧化值 GB 5009.227
4 GB 5009.15 14 酸價 GB 5009.229
5
GB 5009.123
《中華人民共和國藥典》
15 崩解時限 《中華人民共和國藥典》
6 六六六 GB 5009.19  16 溶散時限 《中華人民共和國藥典》
7 滴滴涕 GB 5009.19 17 pH值 GB 5009.237 
8 桔青霉素 GB 5009.222 18 溶化性 《中華人民共和國藥典》
9 黃曲霉毒素M1、M2 GB 5009.24 19 粒度 《中華人民共和國藥典》
10 黃曲霉毒素B1 GB 5009.22 20 展青霉素 GB 5009.185
 

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